other بررسی تأثیر آلفا-آمانیتین بر تکثیر سلول های HepG2 کشت داده شده بر غشای آمنیونی حاوی سلول HUVEC بیوشیمی Biochemistry مقاله پژوهشی Research Article <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="letter-spacing:-.2pt">سابقه و هدف:</span></span></b><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="letter-spacing:-.2pt"> استفاده از داروهای شیمیایی به‌منظور درمان سرطان کبد دارای عوارض جانبی متعددی می‌باشد. ازاین‌رو استفاده از دارویی که با عوارض کمتر بتواند بر زنده‌مانی سلول‌های سرطانی تأثیرگذار باشد از اهمیت به‌سزایی برخوردار است.&nbsp; هدف از مطالعۀ حاضر، بررسی تأثیر مهاری آلفا-آمانیتین بر سلول‌های </span></span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span style="letter-spacing:-.2pt">HepG2</span></span><span b="" nazanin="" style="font-family:"><span style="letter-spacing:-.2pt"> می‌باشد. </span></span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span b="" nazanin="" style="font-family:">مواد و روش&shy;ها:</span></b><span b="" nazanin="" style="font-family:"> در این مطالعه، کشت سلول‌های </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">HepG2</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> بر روی پردۀ آمنیون حاوی </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">HUVEC</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> انجام شد و پس از تیمار با آلفا-آمانیتین، زنده‌مانی سلول‌ها با استفاده از تست </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">MTT</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> و میزان آپوپتوز با استفاده از تکنیک فلوسایتومتری بررسی شد. تعیین کمیّت مالون‌دی‌آلدهید (</span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">MDA</span><span b="" nazanin="" style="font-family:">)، میزان فعالیت آنزیمی سوپراُکسید دیسموتاز </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">(SOD)</span><span b="" nazanin="" style="font-family:">، وضعیت اُکسیدانی کل (</span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">TOS</span><span b="" nazanin="" style="font-family:">) و ظرفیت آنتی‌اُکسیدانی کل (</span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">TAC</span><span b="" nazanin="" style="font-family:">) با استفاده از روش کالریمتری انجام شد. ارزیابی میزان فاکتور</span> <span b="" nazanin="" style="font-family:">نکروز تومور آلفا (</span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">TNF-&alpha;</span><span b="" nazanin="" style="font-family:">) با تکنیک ایمونوسیتوشیمی (</span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">ICC</span><span b="" nazanin="" style="font-family:">) انجام شد. </span></span></span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:normal"><span style="direction:rtl"><span style="unicode-bidi:embed"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span b="" nazanin="" style="font-family:">یافته‌ها:</span></b><span b="" nazanin="" style="font-family:"> نتایج تست </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">MTT</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> نشان داد که تیمار سلول‌های </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">HepG2-Amnion</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> و </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">HepG2-Amnion-HUVEC</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> با غلظت‌های 250 و 500 پیکوگرم بر میلی‌لیتر داروی آلفا-آمانیتین باعث کاهش معنادارِ زنده‌مانی سلول‌های </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">HepG2</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> شد. همچنین نتایج فلوسایتومتری نشان داد که بروز آپوپتوز در سلول‌های </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">HepG2-Amnion-HUVEC</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> و </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">HepG2-Amnion</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> تیمارشده با آلفا-آمانیتین به‌طور معناداری افزایش یافته است. نتایج آزمون بیوشیمیایی افزایش میزان </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">MDA</span><span b="" nazanin="" style="font-family:">، </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">TOS</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> و کاهش سطح </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">SOD</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> و </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">TAC</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> را در هر دو گروه هم</span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt"><span calibri="" style="font-family:">‌</span></span><span b="" nazanin="" style="font-family:">کِشتی‌شده با آمنیون و </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">Amnion-HUVEC</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> و تیمارشده با آلفا-آمانیتین را نشان داد. نتایج </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">ICC</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> نشان داد که&nbsp; میزان بیان پروتئین </span><span dir="LTR" style="font-size:10.0pt">TNF-&alpha;</span><span b="" nazanin="" style="font-family:"> در هر دو گروه تیمارشده با آلفا-آمانیتین افزایش معناداری داشته است. </span></span></span></span></span></span><br> <b><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:107%"><span b="" nazanin="" style="font-family:">نتیجه‌گیری:</span></span></span></b><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:107%"><span b="" nazanin="" style="font-family:"> استفاده از غشای آمنیونی برای کشت سلول‌های </span></span></span><span style="font-size:10.0pt"><span style="line-height:107%"><span new="" roman="" style="font-family:" times="">HepG2</span></span></span><span dir="RTL" lang="FA" style="font-size:12.0pt"><span style="line-height:107%"><span b="" nazanin="" style="font-family:"> می‌تواند سبب تأثیر ضدسرطانی قابل‌توجه آلفا-آمانیتین بر این نوع سلول‌ها شود. </span></span></span> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:normal"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:10.0pt">Aim</span></b> <b><span style="font-size:10.0pt">and Background</span></b><b><span style="font-size:10.0pt">:</span></b><span style="font-size:10.0pt"> The use of chemical drugs to treat liver cancer has many side effects. </span><span lang="EN" style="font-size:10.0pt">Therefore, the use of a drug that can affect the survival of cancer cells with fewer side effects is of great importance. The aim of the present study was to investigate the inhibitory effect of alpha-amanitin on HepG2 cells.</span></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:normal"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:10.0pt">Materials and Methods: </span></b><span lang="EN" style="font-size:10.0pt">In this study, HepG2 cells were cultured on amniotic membrane containing HUVEC and after treatment with alpha-amanitin, cell viability was assessed using MTT assay and apoptosis was assessed using flow cytometry. Malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD) enzyme activity, total oxidant status (TOS) and total antioxidant capacity (TAC) were quantified using calorimetry. Tumor necrosis factor alpha (TNF-&alpha;) levels were assessed using immunocytochemistry (ICC).</span><b><span style="font-size:10.0pt"></span></b></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:normal"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:10.0pt">Results:</span></b> <span lang="EN" style="font-size:10.0pt">The results of the MTT test showed that the treatment of HepG2-Amnion and HepG2-Amnion-HUVEC cells with concentrations of 250 and 500 pg/ml of alpha-amanitin significantly reduced the viability of HepG2 cells. Also, the results of flow cytometry showed that the incidence of apoptosis in HepG2-Amnion-HUVEC and HepG2-Amnion cells treated with alpha-amanitin significantly increased. The results of the biochemical test showed an increase in the levels of MDA, TOS and a decrease in the levels of SOD and TAC in both groups co-cultured with amnion and Amnion-HUVEC and treated with alpha-amanitin. The results of the ICC showed that the expression of TNF-&alpha; protein in both groups treated with alpha-amanitin significantly increased.</span><b><span style="font-size:10.0pt"></span></b></span></span></span><br> <span style="font-size:12pt"><span style="line-height:normal"><span new="" roman="" style="font-family:" times=""><b><span style="font-size:10.0pt">Conclusion:</span></b> <span lang="EN" style="font-size:10.0pt">Using amniotic membrane to culture HepG2 cells can result in a significant anticancer effect of alpha-amanitin on this type of cell.</span><span style="font-size:10.0pt"></span></span></span></span><br> &nbsp; آلفا-آمانیتین, سرطان کبد, پردۀ آمنیون, آپوپتوز, TNF-α, HepG2 . Alpha-Amanitin, Hepatocellular Carcinoma, Amniotic Membrane, Apoptosis, TNF-α, HepG2 35 48 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-1958-2&slc_lang=other&sid=1 Ghazaleh Hajimokhtari1 غزاله حاجی مختاری 100319475328460015588 100319475328460015588 No Department of Biology, SR. C., Islamic Azad University, Tehran, Iran ﮔﺮوه زیست‌شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم‌ وتحقیقات، تهران، ایران. Hanieh Jafary هانیه جعفری h-jafary@srbiau.ac.ir 100319475328460015589 100319475328460015589 Yes Department of Biology, SR. C., Islamic Azad University, Tehran, Iran ﮔﺮوه زیست‌شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم‌ وتحقیقات، تهران، ایران. Zahra Kianmehr زهرا کیان مهر 100319475328460015590 100319475328460015590 No Department of Biochemistry, Faculty of Biological Sciences, North Tehran Branch, Islamic Azad University ﮔﺮوه بیوشیمی، دانشکدۀ علوم‌زیستی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران شمال، تهران، ایران.