New Cellularand Molecular Biotechnology Journal

other شناسایی زیرواحد B توکسین کلرا با استفاده از تکنیک اِلایزا| Identification of B subunit of Cholera Toxin Using ELISA Technique | ژنتیک Genetics مقاله پژوهشی Research Article <div style="border-bottom:solid #002465 1.5pt; border-top:none; border-left:solid #002465 1.5pt; border-right:none; padding:0cm 4.0pt 1.0pt 0cm">زمینه و هدف: ویبریو کلرا (Vibrio cholerae) باکتریِ گرم‌منفی عاملِ بیماریِ وباست که از طریقِ تولیدِ توکسینِ کلرا باعث اسهالِ شدید و کم‌آبی می‌شود. تشخیصِ سریع و دقیقِ این توکسین برای کنترلِ بیماری ضروری است. این مطالعه با تولیدِ آنتی‌بادی‌های اختصاصی از موش و خرگوش، روشی سریع، دقیق و مقرون‌به‌صرفه برای تشخیص ویبریو کلرا با استفاده از تکنیک اِلایزا ارائه می‌دهد. مواد و روش‌ها:  ژن نوترکیب CtxB با استفاده از IPTG در E.coli  BL21 (DE3) بیان و با وسترن‌بلات تأیید شد. پروتئینِ rCtxB خالص‌شده به‌صورت زیرجلدی به خرگوش و موش تزریق شد. آنتی‌بادی‌ها جدا و تخلیص شدند، سپس حساسیتِ آنتی‌بادیِ خالص‌شده با تکنیک اِلایزای ساندویچ و ارزیابیِ اختصاصیتِ آن، با تکنیک اِلایزای غیرمستقیم با استفاده از توکسین‌های مشابه انجام شد. نتایج: در این مطالعه، آنتی‌بادی‌های استخراج و تخلیص‌شده از سرمِ موش و خرگوش در تکنیک اِلایزا مورداستفاده قرار گرفتند. نتایجِ جذبِ نوری نشان داد که آنتی‌بادی‌‌های تولیدشده قادر به شناساییِ اختصاصیِ توکسینِ CtxB هستند. میزان حساسیتِ بالای این روش (شناساییِ میزانِ ۸ نانوگرمِ توکسین) و حداقل واکنشِ متقاطع با توکسین‌های مشابه StxB وLtB ، بیانگر اختصاصیتِ مناسبِ آنتی‌بادی‌ها می‌باشد. نتیجه‌گیری: تکنیک اِلایزا مبتنی‌بر پروتئین و آنتی‌بادی روشی سریع، دقیق و مقرون‌به‌صرفه برای شناساییِ ویبریو کلرا نسبت به روش‌های کشتِ میکروبی یا مولکولیِ پیشرفته محسوب می‌شود. این روش با حساسیتِ بالا، اختصاصیتِ مناسب و عدم‌نیاز به تجهیزاتِ پیشرفتۀ آزمایشگاهی، امکانِ تشخیصِ سریعِ توکسینِ کلرا را در نمونه‌های بالینی و محیطی فراهم می‌کند.</div> <div style="border-bottom:solid #002465 1.5pt; border-top:none; border-left:none; border-right:solid #002465 1.5pt; padding:0cm 0cm 1.0pt 4.0pt">Background and Aim: Vibrio cholerae is a Gram-negative bacterium that causes cholera, a disease characterized by severe diarrhea and dehydration due to the production of cholera toxin. Rapid and accurate detection of this toxin is essential for effective disease control. This study presents an ELISA-based method that is rapid, accurate, and cost-effective for detecting V. cholerae. This method involves producing a recombinant cholera toxin B subunit (CtxB) protein and generating specific antibodies in mice and rabbits. Materials and Methods: The recombinant CtxB gene was expressed in E. coli BL21 (DE3) using IPTG induction and confirmed by Western blot analysis. The purified rCtxB protein was then administered subcutaneously to rabbits and mice. The antibodies were then isolated and purified. Their sensitivity was assessed using a sandwich ELISA, and their specificity was evaluated using an indirect ELISA against similar toxins. Results: In this study, we used the ELISA technique with antibodies extracted and purified from the sera of mice and rabbits. Following colorimetric analysis, the optical density results demonstrated that the produced antibodies could specifically recognize the CtxB toxin. The method's high sensitivity (detecting eight nanograms of toxin) and minimal cross-reactivity with other toxins (StxB and LtB) confirm the antibodies' suitable specificity. Conclusion: The protein- and antibody-based ELISA technique offers a rapid, accurate, and cost-effective approach for detecting V. cholerae compared to microbial culture methods or advanced molecular techniques. This method enables rapid detection of cholera toxin in clinical and environmental samples due to its high sensitivity, suitable specificity, and lack of requirement for advanced laboratory equipment. </div> اسهال,زیرواحدِ B ویبریو کلرای توکسین, اِلایزای ساندویچ,اِلایزای غیرمستقیم, Diarrhea, Vibrio Cholerae Toxin B Subunit, Sandwich ELISA, Indirect ELISA 23 35 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-1367-13&slc_lang=other&sid=1 Mahboobeh Hassanifard محبوبه حسنی فرد 100319475328460015826 100319475328460015826 No Department of Molecular Genetics, North Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran - گروه ژنتیک مولکولی، دانشکدۀ علوم زیستی، دانشگاه آزاد تهران شمال، تهران، ایران Gholamreza Olad غلامرضا اولاد 100319475328460015827 100319475328460015827 No Applied Biotechnology Research Center, New Health Technologies Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژیِ کاربردی، پژوهشکدۀ فناوری‌های نوین سلامت، دانشگاه علوم‌پزشکی بقیهالله (عج)، تهران، ایران Jafar Amani جعفر امانی 100319475328460015828 100319475328460015828 Yes Applied Microbiology Research Center, Biomedicine Technologies Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات میکروبیولوژیِ کاربردی، پژوهشکدۀ فناوری‌های زیست‌پزشکی، دانشگاه علوم‌پزشکی بقیهالله (عج)، تهران، ایران