Volume 11, Issue 44 (9-2021)                   NCMBJ 2021, 11(44): 19-28 | Back to browse issues page

XML Persian Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Zamanian M, Noormohammadi Z, Sharifi Z, Akbarzadeh T, Bineshian F. Comparison of spring and autumn Artemisia aucheri extracts in in inhibition of HSV- 1 virus replication. NCMBJ 2021; 11 (44) :19-28
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-1416-en.html
Department of Medicinal Chemistry, Faculty of Pharmacy, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran
Full-Text [PDF 511 kb]   (640 Downloads)     |   Abstract (HTML)  (2282 Views)
Full-Text:   (998 Views)

Comparison of spring and autumn Artemisia aucheri

extracts in in inhibition of HSV- 1 virus replication

Mahsa Zamanian1, Zahra Noormohammadi1

Zohreh Sharifi*2,Tahmineh Akbarzadeh3 ,Farahnaz Bineshian4 ,

1. Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran

2. Blood Transfusion Research Center, High Institute for Research and Education in Transfusion Medicine, Tehran, Iran

3. Department of Medicinal Chemistry, Faculty of Pharmacy, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran

4. Department of Parasitology and Mycology, Faculty of Medicine, Semnan University of Medical Sciences, Semnan, Iran.

Abstract

Aim and Background: The use of plants as medicine has always been considered. In the present study, the effect of aqueous extract collected in spring and autumn of Artemisia aucheri on the survival of HSV- 1 virus-infected cells was investigated.

Materials and Methods: In this study, the effect of aqueous extract of Artemisia aucheri in spring and autumn on the survival of Vero cell line after HSV- 1 infection at different times and concentrations was compared using TCID50 and MTT methods. The effect of aqueous extract of Artemisia aucheri at concentrations of 25, 50, 75, and 100 mg / ml on Vero cell line infected with HSV- 1 virus was performed for 24 hours in DMEM medium containing 2% (FBS) and then a dose of 50% Tissue Culture Infectious Dose(TCID50) was determined. Cell viability was also assessed by MTT assay at 2-, 0, 4, 8, and 24 hours.

Results: The dose of 50% TCID50 with different dilutions of spring and autumn aqueous extracts of Artemisia aucheri was determined on Vero cells infected with (MOI = 0.1) HSV- 1 virus by inverted microscope and compared by MTT method. Concentrations of 50, 75, µg/ml and 100 µg/ml of spring extract and concentrations of 50 and 75 µ g / ml of autumn extract significantly reduced viral infection. Among them, spring extract with a concentration of 75 µ g / ml showed the highest viral inhibition and cell survival. Also, a significant difference was observed between spring and autumn aqueous extracts of Artemisia aucheri on cell survival (r = 0.97, P =0.0002).

Conclusion: The results indicated that the spring aqueous extract of Artemisia aucheri has a significant anti-HSV- 1 antiviral effect compared to the autumn aqueous extract of Artemisia aucheri (A = 0.0001) (P = 0.0001).

Keywords: HSV- 1, Artemisia aucheri aqueous extracts, MTT assay, TCID50, Iau Science .

 

 

 

 

 

 

Corresponding author:

Blood Transfusion Research Center, High Institute for Research and Education in Transfusion Medicine, Tehran, Iran Email: z.sharifi@ibto.ir

 

 

مقایسه دو عصاره آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری

 در مهار تکثیر ویروس 1HSV-  

مهسا زمانیان1، زهرا نور محمدی1، زهره شریفی*2، تهمینه اکبرزاده3، فرحناز بینشیان4

1.گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران

2. مرکز تحقیقات انتقال خون، موسسه عالی تحقیقات و آموزش در پزشکی انتقال خون، تهران، ایران

3. گروه شیمی دارویی، دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران

4. گروه انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی سمنان، سمنان، ایران.


چکیده

سابقه و هدف: استفاده از گیاهان به­عنوان دارو همیشه مورد توجه بوده است. در مطالعه حاضر، اثر عصاره آبی جمع­آوری شده در فصل بهار و پاییز آرتمیزیا اوشری ((Artemisia aucheri  بر بقای سلول­های آلوده به ویروس 1HSV- بررسی شد.

مواد و روش­ها: در این مطالعه، اثر عصاره آبی جمع­آوری شده آرتمیزیا اوشری در فصل­های بهار و پاییز بر روی بقای سلولیVero پس از آلودگی با ویروسHSV- 1 در زمان­ها  و غلظت­های مختلف با استفاده از دو روش TCID50 و MTT مورد مقایسه قرار گرفت.  اثر عصاره آبی آرتمیزیا اوشری با غلظت 25 ،50، 75 و100 میگروگرم بر میلی­لیتر بر روی رده سلولی Vero آلوده به ویروس HSV- 1 طی مدت 24 سـاعت در محیط DMEM  حاوی 2% (FBS) انجام گرفت و سپس دوز 50 درصد آلودگی سلول(TCID50) تعیین شد. هم­چنین زنده­مانی سلولی توسط تست MTT  در ساعت­های 2 قبل از آلودگی با ویروس 1HSV- ، 0، ،8 و24 بررسی شد .

یافتــه­ها: تعیین دوز 50 درصد آلودگی سلول (TCID50) با رقت­های مختلف عصاره آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری بر روی سلول­های  Vero آلوده با (1/0MOI=) ویروس 1  HSV-با میکروسکوپ اینورت انجام شد و با روش MTT مقایسـه شد. غلظت­های 50، 75 و 100 میکروگرم بر میلی­لیتر عصاره فصل بهار و غلظت­های50 و 75 میکروگرم بر میلی­لیتر عصاره فصل پاییز به­طور قابل توجهی عفونت ویروس1HSV- را (از ۱۰۸ به ۱۰۶)کاهش داد. که در این میان عصاره بهاره با غلظت 75  میکروگرم بر میلی­لیتر بیش­ترین مهار ویروسی و میزان بقای سلولی را نشان داد. هم­چنین اختلاف معناداری بین دو عصاره آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری بر روی بقای سلول مشاهده شد (97/0r = ، 0002/0 (P=.رگرسیون دو روش انجام شده (TCID50وMTT ) نشان داد که همبستگی بین نتیجه عصاره بهاره و پاییزه وجود دارد. 

نتیجه­گیری: نتایج نشان داد که کاهش تیتر ویروس در عصاره آبی بهاره آرتمیزیا اوشری در مقایسه با عصاره آبی پاییزه آرتمیزیا اوشری به­طور معنی­داری 1HSV-   )0001/0 (P= بیش­تر بود که حاکی از مؤثر بودن عصاره در کاهش تیتر ویروسی است و می­توان نتیجه گرفت که عصاره بهاره آرتمیزیا اوشری برای درمان تبخال مؤثر است.

واژگان کلیدی: HSV- 1 ، عصاره آبی آرتمیزیا اوشری، MTT assay  ،، TCID50، Iau Science .


 

ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ

نویسنده مسئول:

مرکز تحقیقات انتقال خون، موسسه عالی تحقیقات و آموزش در پزشکی انتقال خون، تهران، ایران

پست الکترونیکی: z.sharifi@ibto.ir

تاریخ دریافت: 03/03/1400

تاریخ پذیرش: 16/04/1400

مقدمه

از شایع­ترین بیماری­های عفونی مسری در سراسر جهان که از طریق بزاق آلوده منتقل می­شود، ویروس هرپس سیمپلکس نوع 1 (تبخال دهانی) است (1). ویروس پنهان شده می­تواند به­طور مکرر سبب عفونت شود (2).

مطالعه بر روی اثر گیاهان بومی هر منطقه در جلوگیری از عفونت­ها مانند ویروس تب خال دارای اهمیت است و ارزش اقتصادی فراوانی دارد. بنابراین در قدم اول لزوم بررسی تست­های اولیه و پایه­ای جهت بررسی اثر ضدویروس بر روی سلول با عصاره گیاهی مورد تحقیق ضروری به­نظر می­رسد.

از طرف دیگر محققین بر آن هستند که با استفاده از روش­های درمانی متفاوت، عوارض شدید داروهای سنتتیک را با استفاده از گیاهان دارویی با عوارض کم­تر بهبود بخشند. گیاهان به­دلیل داشتن تانن­ها، فلاونوئیدها و آلکالوئیدها که خاصیت ضدویروسی دارند مورد توجه قرار گرفته­اند (3). درمنه (آرتمیزیا) (Artemisia) یک تیره بزرگ و متنوع از گیاهان است که بین 200 تا 400 گونه از خانواده گل مرواریدAsteraceae)) دارد. درمنه شامل گیاهان علفی و بوته­های مقاوم است که به­دلیل ترکیب­های شیمیایی قدرتمند در روغن­های اساسی شناخته شده­اند. گونه­های درمنه در آب و هوای معتدل هر دو نیمکره، به­طور معمول در زیستگاه­های خشک یا نیمه خشک رشد می­کنند. گونه­های قابل توجه عبارتند از: شپشک معمولی ( A. vulgaris) ، مریم گلی (A. tridentate) ، A. annua (مریم گلی) ،افسنطین ) A. absinthium) ،ترخون ) A. dracunculus) و چوب جنوب ) (A. abrotanum (4).

یک بررسی جامع از گونه­های مختلف آرتمیزیا را با دامنه وسیع از فعالیت­های بیولوژیکی شامل ضد مالاریا، ضد سمی، ضد باکتریایی، ضد قارچ ، ضد انگل وآنتی­اکسیدان نشان داده است. برخی از فعالیت­های بسیار مهم دارویی از این جنس آرتمیزیا کشف شده است، به­ویژهArtemisinin ، که ترپنوئیدها، فلاونوئیدها، کومارین­ها، کافئینوکلینیک اسیدها، استرول­ها و استیلن­ها کلاس­های اصلی فیتوکامپوژن­های جنس را تشکیل می­دهند (5)  هم­چنین ماده جدید از گونه سیبری آرتمیزیا در درمان سرطان به­نام تترا هیدرو فوران مؤثر شناخته شد (6). از این میان پلی­فنول­های اسید چرب که در برگ چای سبز هم موجود است، از عوامل مؤثر بر ضد ویروسی HSV می­تواند باشد (7،8). در مطالعه­ای از بخش­های فعال حاوی تانن عصاره Cornus Canadensis برای جلوگیری از جذب ویروس 1HSV-  استفاده شد (9). آرتمیزینین، ماده مؤثره گیاه آرتمیزیا، اثر مهاری بر رشد توکسوپلاسما گوندی داشته است (10). هم­چنین خاصیت ضد انگلی عصاره آرتمیزیا اوشری بهاره و پاییزه بر روی ماکروفاژها علیه انگل لیشمانیا مطالعه شده است (11).

خاصیت ضد لیشمانیایی عصاره آرتمیزیا نیز بعنوان یکی ازداروهای گیاهی herbal medicine (HM) بررسی شده است (12،13). اثر مهاری عصاره آبی و فراکشن کلروفرم از قسمت­های هوایی گیاه بلغاری Artemisia chamaemelifolia Vill. (Asteraceae) در برابر تکثیر سویه BA HHV نوع 2 (حساس به آسیکلوویر) وسویه DD (مقاوم به آسیکلوویر) در شرایط in vitro بررسی شده است (14).

در این مطالعه، اثرهای ضد ویروسی عصاره آبی گیاه Artemisia aucheri با هدف مقایسه بین دو  عصاره آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری در تعیین بقای رده سلولی Vero آلوده به ویروس 1HSV- با استفاده از روش­های  TCID50و MTT بررسی شده است.

مواد و روش­ها

جمع­آوری گیاه آرتمیزیا اوشری و تهیه عصاره

این مطالعه تجربی در آزمایشگاه ویروس شناسی مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران انجام پذیرفت حدود. 100گرم اندام­های هوایی گیاه بهاره و 100 گرم از اندام­های هوایی گیاه پاییزه Artemisia aucheri از منطقه سمنان در طی دو بار در سال (۱۳۹۹) جمع­آوری شد و طبق پروتکل مقاله Zamanian و همکاران 2021 عصاره گیاه آبی گیاه آرتمیزیا اوشری به روش مایع- مایع تهیه شد و روی رده سلولی Vero کشت داده شده و آلوده به ویروس  1HSV-، برای مطالعه­ها اثر داده شد (31،15).

سنجش دوز عفونی کشت بافت (TCID50)( Tissue Culture Infectious Dose)

تیتر ویروس با روش سنجش دوز عفونی کشت بافت و فرمول Reed and Muench محاسبه شد. سنجش دوز عفونی کشت بافت یک روش وابسته­به اثر سیتوپاتیک (Cytopathic effect) (CPE) است. تکثیر ویروس­ها باعث اثر سیتوپاتیک می­شوند. مهار اثر سیتوپاتیک نشانگر، فعالیت ضد ویروسی است. به­طور خلاصه، سلول­های Vero در محیط کشت (DMEM ؛Gibco) همراه با 10٪ سرم جنین گاو (FBS) و 1٪ پنی­سیلین/استرپتومایسین در فلاسک و در دمای 37 درجه سانتی­گراد و 5 درصد2CO انکوبه می­شود. پس از رسیدن سلول­ها به تراکم 85٪، سلول­ها با استفاده از 2٪ تریپسین جدا می­شوند و در پلیت 96 خانه به تعداد 104 برای 24 ساعت کشت داده شد. کشت سلول با غلظت­های لگاریتمی ویروس و عصاره با غلظت­های  25 تا 100میکروگرم در میلی­لیتر مخلوط شدو به­مدت 7 روز تا ظاهر شدن اثر سیتوپاتیک انکوبه شد و با استفاده از میکروسکوپ معکوس سلول­ها مورد ارزیابی قرار گرفت. مقادیر سنجش دوز عفونی کشت بافت با استفاده از روش Reed and Muench محاسبه شد. در نتیجه، نبود اثر سیتوپاتیک به­عنوان شاخصی از فعالیت­های ضد ویروسی عصاره­ها در نظر گرفته شد و 3 چاهک برای کنترل ویروس (کنترل مثبت) و 3 چاهک برای کنترل داروی آسیکلوویر و هم­چنین کنترل محیط و سلول­ها (کنترل منفی) به­عنوان شاهد در این آزمایش قرار گرفتند (16).

روش روش رنگ­سنجی برای ارزیابی فعالیت متابولیک سلول MTT) (

در روش رنگ سنجی(colorimetric assay for assessing cell metabolic activity)، پس از تیمار سلول­ها به­مدت 24 ساعت جهت انجام تست رنگ­سنجی ،محیط رویی خارج گردید و سلول­ها توسط محلول نمکی بافر فسفات (PBS )شستشو شده و مقدار µl  100 محلول mg/mL MTT 5) رقیق شده در PBS) به هر چاهک اضافه شد و پلیت به­مدت چهار ساعت در دمای0C37  و تاریکی انکوبه گردید. پس از آن محلول رویی هر چاهک خارج شده و به­مقدار µl 100 ایزوپروپانل  به هر چاهک اضافه شده و به­مدت 15-20 دقیقه در دمای 0C37 انکوبه گردید و سپس جذب نوری آن  در nm 570 خوانده شد و بقای سلولی، محاسبه گردید. درصد بقای سلولی به­صورت (مقدار جذب نوری گروه کنترل/ مقدار جذب نوری گروه تیمار شده) ×  100 محاسبه شد. تمامی آزمایش­ها به­صورت مستقل سه بار تکرار شد (17).

آزمایش رنگ­سنجی با سه بار تکرار انجام شد و داده­ها به­صورت میانگین± انحراف معیار بیان شده است. تجزیه و تحلیل داده­ها با روش آنالیز واریانس یک­طرفه  با استفاده از  نرم­افزار IBM SPSS Statistics 25  محاسبه شد و تمام بررسی­ها سطح معناداری آزمون­ها  05/0> P  در نظر گرفته شد.

یافته­ها

اثرهای غلظت­های عصاره­های گیاهی بر روی دوز عفونی کشت سلول( (TCID50

اثر عصاره آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری بر روی ویروس 1HSV- با 1/0 MOI =در کشت سلول­های Vero  با میکروسکوپ اینورت ارزیابی و آلودگی و تکثیر ویروس HSV- 1 با غلظت­های متفاوت عصاره­ها در سلول­های Vero تعیین شد.

فعالیت ضد ویروسی با استفاده از غلظت­های 25 تا 100  µg/ml عصاره آبی فصل بهار و پاییز گیاه آرتمیزیا اوشری هم­زمان با تلقیح ویروس1/0  MOI =1HSV- به­مدت 24 ساعت انجام شد. تیتری از ویروس است که با روش 50 درصد دوز عفونی کننده کشت سلولی (TCID50) تعیین گردید جدول 1.

 

جدول 1. کاهش تیتراسیون ویروسیHSV- 1 (اثرهای غلظت­های عصاره­های گیاهی بر روی دوز عفونی کشت سلول (TCID50

 

کاهش لگاریتم تیتر ویروس با (TCID50)

زمان

(ساعت)

 

تیمار با µg/ml25

تیمار با µg/ml50

تیمار با µg/ml75

تیمار با µg/ml100

کنترل ویروس

 

پاییزه

بهاره

پاییزه

بهاره

پاییزه

بهاره

پاییزه

بهاره

07/0±5/6

02/0±3/6

03/0±6/5 *

02/0±7/5*

02/0±5/5

06/0±4/4*

40/0±6/1

51/0±7/5  *

07/0±8/7

24

 

*  p<0001/0

 

 

در این مطالعه، کاهش لگاریتم تیتر ویروسی در غلظت­های آزمایش شده با عصاره­های گیاهی در مقایسه با کنترل ویروس که از 8/7 به حدود 4/4 کاهش می­یابد.

همان­طور که در جدول 1 نشان داده شده است ، پنج مورد استخراج (عصاره آبی فصل بهار آرتمیزیا اوشری در غلظت 50،75 و µg/ml 100 و در عصاره فصل پاییز 50 و  µg/ml 75) به­طور قابل­توجه و معنی­داری (01/0 p<) عفونت ویروسی را کاهش داد. که در این میان عصاره بهاره  µg/ml75 بیش­ترین مهار ویروسی 104را نشان داد.

داده­ها به­صورت SD از سه آزمایش مستقل است. آزمون ANOVA  یک­طرفه و مقایسه­های چندگانه برای تجزیه و تحلیل آماری استفاده شد.

غلظت­های مختلف عصاره­های آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری بر روی سلول آلوده به ویروس 1HSV-

روش MTT با 3بار تکرار بر روی سلول آلوده به ویروس 1HSV- در سه سری جداگانه انجام شد و اثر سیتوپاتیک بعد از 24 ساعت، پایین­ترین میزان زنده مانی سلول با ویروس HSV- 1 را نشان داد. )نمودار1(.

در روش MTT میزان بقای سلولی نسبت­به گروه کنترل سلول و داروی آسیکلوویر µg/ml50 در غلظت­های  µg/ml75 عصاره آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری تفاوت معناداری داشت. 0002/0 p= و بقای سلولی در کنترل ویروس به پایین­ترین مقدار خود با میانگین 32/14% رسید (جدول 2).

میانگین بقای سلولی به­دست آمده نسبت­به گروه کنترل سلول و داروی آسیکلوویر با گروه کنترل ویروس معادل  2/4% در 24 ساعت بعد از انکوباسیون بود، در صورتی­که در رقت  µg/ml75 بهاره بالاترین بقای سلولی% 7/66 و برای عصاره پاییزه در همین غلظت بالاترین بقا%6/57 بود و سلول­های vero به­عنوان معیار کنترل سلولی در نظر گرفته شد (جدول2) و همانطوری­که در نمودار 2 مشاهده می­شود میزان بقای سلولی غلظت  µg/ml75 عصاره آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری نسبت­به گروه کنترل ویروس تفاوت معناداری داشت (001/0. p<).

غلظت­های مختلف عصاره های آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری به سلول Vero اضافه شد و درصد سلول­های زنده بعد از 24 ساعت به­روش MTT بررسی شد. نتایج بر اساس 3 بار تکرار مستقل برای هر تست و به صورت میانگین ± انحراف معیار نشان داده شده است (جدول 2).

همبستگی بین دو گروه بهاره و پاییزه عصاره آبی آرتمیزیا اوشری

براساس نتایج به­دست آمده از رگرسیون بقای سلولی، میزان هم­بستگی چشم­گیری از نوع خطی، مثبت و معنادار بین دو گروه عصاره موجود است و ضریب هم­بستگی معنی­داری بین روش­های MTT و TCID50 در عصاره آبی آرتمیزیا اوشری وجود داشت (97/0 r = ، 0002/0 (P=.

 

نمودار 1. مقایسه غلظت­های مختلف عصاره­های آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری بر روی سلول آلوده به ویروس  1HSV- با روشMTT طی 24 ساعت.

 

 

 

جدول 2. تفاوت میزان بقای سلول­هایVero پس از آلودگی با ویروس  1HSV- با بررسی اثر ضد ویروسی عصاره آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری  به­روش MTT

P-value

در صد سلول زنده پس از مجاورت با عصاره آبی 24 ساعت بعد با آلودگی سلول با ویروس

P-value

در صد سلول زنده پس از مجاورت با عصاره آبی 8 ساعت بعد با آلودگی سلول با ویروس

P-value

در صد سلول زنده پس از مجاورت با عصاره آبی 4 ساعت بعد با آلودگی سلول با ویروس

P-value

در صد سلول زنده پس از مجاورت با عصاره آبی همزمان با آلودگی سلول با ویروس

P-value

در صد سلول زنده پس از مجاورت با عصاره آبی  2ساعت قبل از آلودگی سلول با ویروس

عصاره آبی آرتمیزیا اوشری

ساعت

/

غلظت

(µg/ml)

*02/0

2/49±6/5

*004/0

4/69±2/1

148/0

6/92±1/1

759/0

9/88 ±4/5

019/0*

1/97 ±9/2

بهاره

25

2/51±1/6

4/83±7/3

7/78±3/9

9/87 ±3/4

6/91 ±3/4

پاییزه

 

975/0

4/51±1/8

00/1

9/73±4/6

*000/0

3/87±3/1

069/0

8/84 ±0/5

062/0

0/91 ±7/2

بهاره

50

8/51±7/7

9/73±3/2

3/77±2/1

4/87 ±8/3

2/93 ±7/2

پاییزه

 

496/0

7/66±0/1

362/0

4/84±7/3

*000/0

6/92±1/1

205/0

9/95 ±1/4

676/0

2/96 ±9/3

بهاره

75

6/57±6/8

9/81±4/7

3/81±1/2

5/89 ±8/1

6/93 ±9/3

پایزه

 

*003/0

4/57±2/1

917/0

5/77±2/2

678/0

5/83±7/1

324/0

7/95 ±0/3

967/0

9/94 ±0/6

بهاره

100

1/46±2/1

2/77±0/4

5/81±3/7

8/91 ±4/6

1/97 ±2/5

پاییزه

 

P-valu* گم­تر از 05/0

 Mean±SD داده­ها به­صورت میانگین ± انحراف معیار از دو آزمون مستقل بیان شده است.

 

 

بحث

هرپس HSV- 1 یکی از شایع­ترین بیماری­های عفونی در انسان است با دو نوع عفونت معرفی می­شوند: 1) عفونت دهان با ویروس هرپس سیمپلکس نوع 1HSV- 2) عفونت تناسلی با نوع دوم)2HSV-) (1). از میان داروهای پیشنهادی برای درمان هرپس، Acyclovir به­طور گسترده­ای به­عنوان داروی انتخابی مورد استفاده قرار می­گیرد (18). یک مشکل عمده در ارتباط با استفاده از آسیکلوویر، توسعه سویه­هایHSV  مقاوم به دارو به­ویژه در بیماران ایدزی است (19). در پی یافتن داروهای ضد هرپسی، گیاهان دارای تانن، فلاونویید و آلکالویید ویژگی­های ضد ویروسی دارند (20).

در این پژوهش اثر ضد ویروسی آرتمیزیا  که بومی ایران است، بر روی ویروس هرپس سیمپلکس تیپ یک بررسی می­شود.

به­نظر می­رسد راهکار درمانی گیاهی جایگزین برای مهار ویروس 1HSV- با استفاده از عصاره گیاهی به­جای داروی روتین (اسیکلوویر) با توجه­به طبیعی بودن این ترکیب نسبت­به داروهای سنتتیک که دارای عوارض کم­تری باشد. به­همین علت ارزیابی عصاره گیاهی آرتمیزیا اوشری بر ویروس 1HSV- با بررسی تفاوت اثر ضد ویروسی گیاه در فصول مختلف سال از اهمیت بالایی برخوردار است.

هدف از این مطالعه ارزیابی عصاره گیاهی آرتمیزیا اوشری در برداشت محصول در فصول مختلف بر مهار ویروس 1HSV- بود.

در این مطالعه با روش MTT جهت تعیین بقای رده سلولی Vero  آلوده به HSV- 1 تیمار شده با غلظت­های مختلف عصاره آبی بهاره و پاییزه آرتمیزیا اوشری در زمان­های مختلف مورد ارزیابی و مقایسه قرار گرفتند. یافته­های به­دست آمده نشان داد که غلظت­ها به­صورت وابسته­به زمان می­تواند سبب افزایش بقای سلولی Vero آلوده بهHSV- 1  گردد و این در حالی بود که نتایج حاصل ازمقایسه TCID50 با روش MTT مورد مطالعه، یکدیگر را تأیید کرده­اند و میزان هم­بستگی بین گروه­ها بالا بود.

در مطالعه ما، عصاره آبی فصل بهار آرتمیزیا اوشری در غلظت µg/ml 50، 75و 100 و عصاره فصل پاییز µg/ml 50 و 75 به­طور قابل­توجهی عفونت ویروسی را کاهش داد. که در این میان عصاره بهاره µg/ml 75 بیش­ترین مهار ویروسی را نشان داد که در تأیید تست MTT با غلظت µg/ml 75 بهاره عصاره آبی آرتمیزیا اوشری با بالاترین بقای سلولی % 7/66 و در همین غلظت برای عصاره پاییزه (%6/57) بود.

نتایج مطالعه­های حاضر در این پژوهش با سایر مطالعه­های انجام گرفته دیگر هم­خوانی دارد. در سال 2019 در مطالعه­های Angelova بالاترین اختلاف در تیتر ویروس تحت درمان و کنترل (در ساعت 4 بعد برای سویه DD و در ساعت 6 برای سویه BA برای 2HSV-) پس از اولین تماس ویروس با عصاره آرتمیزیا اندازه­گیری شدکه نشان از این داشت که عصاره آبی آرتمیزیا بیش­تر از فراکشن کلروفرمی در مهار تیتر ویروسی اثر داشت. در مطالعه­های ما تأثیر عصاره بهاره از عصاره تهیه شده در فصل پاییز آرتمیزیا اوشری مؤثرتر نتیجه داد (14) .

یکی از سؤال­های مهم این ا ست که کدام روش آزمایشگاهی برای آغاز تشخیص یک داروی طبیعی جایگزین مناسب ا ست؟ مطالعاه­های Hosseini در 2014 نشان داد که استفاده از رنگ سنجی  MTT و رنگ­آمیزی تریپان­بلو می­توانند روش­های مناسبی در ارزیابی بقای سلولی باشد ولی رنگ­آمیزی با تریپان­بلو در اولویت نسبت­به روش MTT قرار نمی­گیرد (21، 22). و روش  MTT نسبت­به روش تریپان­بلو از حساسیت بیش­تری برخوردار است (23)، نتایج تحقیقات پروژه ما نیز نشان از تأیید حساسیت روش MTT داشت. در مطالعه سال 2002 روش رنگ­سنجی با روش رادیو اکتیو مورد مقایسه قرار گرفته بود که نتایج حاصله دارای هم­بستگی و حساسیت قابل­قبول بود ولی روش رنگ سنجی به­دلیل کم خطر بودن و سهولت پیشنهاد گردید (24). بنابر گزارش­های محققین، روش MTT روشی دقیق و سریع در تعیین حساسیت دارویی در طی پروسه درمان است و مناسب بودن، هزینه کم و سهولت انجام کار سبب کاربرد فراوان این روش شده است (25) و در آزمایش­های ما نیز زمان صرف شده برای روش MTT کم­تر بوده و سهولت بیش­تری نسبت­به روش TCID50 داشت.

در مطالعه­های Rasouli در سال 2020 هم از مقایسه دو روش تریپان­بلو و MTT برای تأیید آنتی­لیشمانیا بودن Achillea  santolina essential oil (ASEO) استفاده شد (13). در مطالعه­ها در صد بقا سلول­های Vero در حضور رق­های لگاریتمی ویروس 1HSV- در سال 2021، بقا در حضور ویروس نسبت­به کنترل کاهش یافت و اختلاف دو روش تریپان­بلو و MTT در ویروس بدون رقت تا رقت 3-10 بیش­تر آشکار بود (15).

در تحقیقات Moradi در سال 2018، پنجاه و چهار گیاه دارویی متعلق­به 36 خانواده مختلف با توانایی ضد ویروسی ثبت شد که 27 گیاه به­طور جداگانه به خانواده­های خاصی از گیاهان تعلق داشت و پتانسیل درمانی گیاهان دارویی در برابر بیماری­های رایج ویروسی ذکر شده در منطقه اعلام شد. از تلفیق گیاهان Sambucus nigra ، Caesalpinia pulcherrima  و Hypericum connatum  که دارای فعالیت­های خاص ضد ویروسی در ریشه کن کردن عفونت ویروسی پیچیده بر روی مدل­های حیوانی تجربی به اثبات رسید، نتایج امیدوار کننده­ای به­دست آمد (26) و نیز مشابه نتایج مطالعه­های ما، فعالیت مهار ویروسی عصاره آبی آرتمیزیا اوشری بر روی ویروس 1HSV- مشهود بود.

فارماکودینامیکی طب سنتی چینی (TCM) نیز در مورد HSV- 1  در مطالعه­های Li  در سال 2018 به­عنوان یک منبع بالقوه برای درمان1HSV- با فعالیت­های ضدویروسی مستقیم (جلوگیری از اتصال ویروس / جذب / نفوذ / همانند سازی) یا غیرمستقیم (کاهش حساسیت­به 1HSV-  یا تنظیم اتوفاژی) عمل کرد (27). نتایج ارائه شده در مطالعه­های Lavoie و همکارانش در سال 2017 از فعالیت ضدویروسی عصاره Cornus canadensis  در طب سنتی آمریکای بومی استفاده شد (9).

طی مطالعه­ای با درمان موضعی و خوراکی Zanqueta و همکاران در سال 2019 نشان داد که اسیدهای فنولیک (اسیدهای کلروژنیک) و لاکتون­های سسکوئیترپن (پارتنولید) CHE(crude  hydroethanolic extract) یعنی ترکیب شیمیایی یک عصاره هیدرواتانولی خام Tanacetum parthenium در برابر عفونت HSV- 1  مؤثر است و نتایج تجویز موضعی آن با آسیکلوویر قابل مقایسه بود (28)، در مطالعه حاضر نیز نتایج 75 میکروگرم بر میلی­لیتر عصاره آبی بهاره آرتمیزیا اوشری با داروی آسیکلوویر در مهار تیتر ویروسی معنی­دار بود 001/0. P=

در تحقیقات Pizzo در سال 2020، فعالیت عصاره­های غنی از پلی­فنول هسته پسته با پوسته پوسته شده طبیعی (NPRE) (Pistacia vera L.)  روی همانندسازی ویروس هرپس سیمپلکس نوع (1HSV- ) در سل لاین Vero برای ارزیابی سمیت سلولی و فعالیت ضدویروسی استفاده شدکه دارای فعالیت مهاری قابل توجهی در برابر HSV- 1 بود (29). در این پروژه نیز مهار ویروسی 1HSV- توسط عصاره آبی آرتمیزیا اوشری در سلول­های Vero با دو روش TCID50  و MTT مشهود بود.

مطالعه Rahiminejad در سال 2018 نشان داد عصاره هیدروالکلی A. absinthium فعالیت ضد لشمانیایی قابل­توجهی در برابر پروماستیگوت­ها و آماستیگوت­ها در غلظت­های مختلف پس از 48 و 72 ساعت نشان دارد (12). در پروژه ما نیز اثر 24 ساعت عصاره آبی آرتمیزیا اوشری را بر ضدویروس 1HSV-  مورد تأیید قرار گرفت (12).

مطالعه Ali, A.N.M و همکاران در2020 نشان داد که اثرهای سیتوتوکسیک عصاره آرتمیزیا اوشری وابسته­به دوز بود. این herbal medicine (HM) از طریق القای پراکسیداسیون لیپید غشا و آپوپتوز، اثرهای سمیت سلولی را علیه سلول­های HT29 سرطان کلون اعمال می­کند (30).

در مطالعه­های KarimiPour در سال 2020 نیز IC50  (نصف غلظت مهار کننده) بعد از 24 ساعت برای عصاره بهاره آرتمیزیا اوشری µg/ml 119و عصاره پاییزه آرتمیزیا اوشری  µg/ml136 بر روی ماکروفاژها علیه انگل لیشمانیا محاسبه شد (11). که نتایج آن مشابه مطالعه ما بود و نشان از حساسیت بیش­تر عصاره آبی بهاره نسبت­به عصاره آبی پاییزه آرتمیزیا اوشری دارد و از نظر آماری معنی­دار بود (97/0 r = ، 0002/0 .(P=.

از محدودیت­های مطالعه حاضر، دسترسی­به اطلاعات و پرداخت هزینه مقاله­ها و متغییرهای ناخواسته (گونه‌ جمع­آوری شده از یک منطقه محدود بود) و لذا در این حیطه هنوز ضرورت انجام پژوهش وجود دارد.

نتیجه­گیری

پژوهش کنونی بیان می­دارد، که عصاره حاصل از دو فصل بهار و پاییز آرتمیزیا اوشری تا حد زیادی با یکدیگر هم­بستگی داشته و با توجه­به حساسیت بیش­تر عصاره آبی فصل بهاره آرتمیزیا اوشری، نسبت­به عصاره آبی فصل پاییزه آرتمیزیا اوشری می­توان نتیجه گرفت که در بررسی نحوه عملکرد عصاره آبی حاصل از گیاه فصل بهاره آرتمیزیا اوشری در مهار رده سلولی Vero آلوده به  1HSV- مؤثرتر عمل کرده و می­تواند با تحقیق­های بیش­تر در درمان هرپس سیمپلکس نوع 1جایگزین داروی سنتتیک پیشنهاد شود.

سپاسگزاری

در اجرای این پروژه تحقیقاتی که در مرکز تحقیقات سازمان انتقال خون ایران انجام گردیده است از مؤسسه عالی طب انتقال خون نهایت قدردانی و سپاس را داریم.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

منابع

1. De Oliveira, A., et al., Inhibition of herpes simplex virus type 1 with the modified green tea polyphenol palmitoyl-epigallocatechin gallate. Food and chemical toxicology, 2013. 52: p. 207-215.

2. Hill, C., et al., Epidemiology of herpes simplex virus types 2 and 1 amongst men who have sex with men attending sexual health clinics in England and Wales: implications for HIV prevention and management. Eurosurveillance, 2009. 14(47): p. 19418.

3. Özçelik, B., M. Kartal, and I. Orhan, Cytotoxicity, antiviral and antimicrobial activities of alkaloids, flavonoids, and phenolic acids. Pharmaceutical biology, 2011. 49(4): p. 396-402.

4. Adewumi, O.A., V. Singh, and G. Singh, Chemical composition, traditional uses and biological activities of artemisia species. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, 2020. 9(5): p. 1124-1140.

5. Bora, K.S. and A. Sharma, The genus Artemisia: a comprehensive review. Pharmaceutical Biology, 2011. 49(1): p. 101-109.

6. Mohamed, T.A., et al., A new Tetrahydrofuran sesquiterpene skeleton from Artemisia sieberi. Journal of the Chinese Chemical Society.

7. Xi, J., et al., Characterization of polyphenols from green tea leaves using a high hydrostatic pressure extraction. International Journal of Pharmaceutics, 2009. 382(1-2): p. 139-143.

8. Dix, R., L. Pereira, and J. Baringer, Use of monoclonal antibody directed against herpes simplex virus glycoproteins to protect mice against acute virus-induced neurological disease. Infection and immunity, 1981. 34(1): p. 192-199.

9. Lavoie, S., et al., Chemical composition and anti-herpes simplex virus type 1 (HSV- 1) activity of extracts from Cornus canadensis. BMC complementary and alternative medicine, 2017. 17(1): p. 1-12.

10. Sarciron, M. and A. Gherardi, Cytokines involved in Toxoplasmic encephalitis. Scandinavian Journal of Immunology, 2000. 52(6): p. 534-543.

11. KarimiPourSaryazdi, A., et al., In-vitro and in-vivo comparative effects of the spring and autumn-harvested Artemisia aucheri Bioss extracts on Leishmania major. Journal of ethnopharmacology, 2020. 257: p. 112910.

12. Rahiminejad, A., et al., The In Vitro Effect of Hydroalcoholic Extract of Artemisia absinthium on the Growth of Leishmania major (MRHO/IR/75/ER) in Peritoneal Macrophages from BALB/c Mice. Jundishapur J. Microbiology, 2018. 11(11).

13. Ayrom, F., S. Rasouli, and B. Shemshadi, In Vitro Antileishmanial Activity of Achillea santolina Essential Oil against Leishmania infantum Promastigote by Methyl Thiazole Tetrazolium (MTT) and Trypan Blue Colorimetric Methods. Archives of Razi Institute, 2020.

14. Angelova, P., et al., ANTIHERPES VIRUS ACTIVITY OF EXTRACTS FROM ARTEMISIA CHAMAEMELIFOLIA VILL. Comptes rendus de l’Académie bulgare des Sciences, 2019. 72(11).

15. Zamanian, M., et al., Comparison of MTT and Trypan Blue methods in determining the survival of Vero cell line in HSV- 1 infection. Scientific Journal of Iran Blood Transfus Organ, 2021. 18(1): p. 18-26.

16. Smither, S.J., et al., Comparison of the plaque assay and 50% tissue culture infectious dose assay as methods for measuring filovirus infectivity. Journal of virological methods, 2013. 193(2): p. 565-571.

17. Burton, J.D., The MTT assay to evaluate chemosensitivity, in Chemosensitivity. 2005, Springer. p. 69-78.

18. Moradi, M.-T., M. Rafieian-Kopaei, and A. Karimi, A review study on the effect of Iranian herbal medicines against in vitro replication of herpes simplex virus. Avicenna journal of phytomedicine, 2016. 6(5): p. 506.

19. Andrei, G., et al., Heterogeneity and evolution of thymidine kinase and DNA polymerase mutants of herpes simplex virus type 1: implications for antiviral therapy. The Journal of infectious diseases, 2013. 207(8): p. 1295-1305.

20. Daikoku, T., et al., Polyphenols including catechin from green tea with in vitro antiviral activity exhibited anti-herpes simplex virus activity but not anti-influenza virus activity in mice. Journal of Traditional Medicines, 2011. 28(2): p. 63-72.

21. Hosseini, F., M. Reza Sam, and N. Jabbari, Radiosensitivity of radioresistant colorectal cancer cells after treatment with docosahexaenoic acid and irradiation. Tehran University Medical Journal, 2014. 72(3): p. 139-146.

22. Bellamakondi, P.K., et al., In vitro cytotoxicity of caralluma species by MTT and trypan blue dye exclusion. Asian J Pharm Clin Res, 2014. 7(2): p. 17-9.

23. Shokrgozar, M., et al., Comparison of MTT and Trypan blue colorimetric methods for determining the cytotoxicity of calprotectin on human stomach cancer cells under laboratory conditions. Kowsar Med J, 2007. 12(2): p. 127-37.

24. Heidari, M., et al., Comparative measurement of in vitro T-2 toxin cytotoxicity using three different cytotoxicity assays. Toxicology mechanisms and methods, 2003. 13(2): p. 153-157.

25. Fotakis, G. and J.A. Timbrell, In vitro cytotoxicity assays: comparison of LDH, neutral red, MTT and protein assay in hepatoma cell lines following exposure to cadmium chloride. Toxicology letters, 2006. 160(2): p. 171-177.

26. Akram, M., et al., Antiviral potential of medicinal plants against HIV, HSV, influenza, hepatitis, and coxsackievirus: a systematic review. Phytotherapy Research, 2018. 32(5): p. 811-822.

27. Li, W., et al., Traditional Chinese medicine as a potential source for HSV- 1 therapy by acting on virus or the susceptibility of host. International journal of molecular sciences, 2018. 19(10): p. 3266.

28. Benassi-Zanqueta, É., et al., Evaluation of anti-HSV- 1 activity and toxicity of hydroethanolic extract of Tanacetum parthenium (L.) Sch. Bip.(Asteraceae). Phytomedicine, 2019. 55: p. 249-254.

29. Musarra-Pizzo, M., et al., In vitro anti-HSV- 1 activity of polyphenol-rich extracts and pure polyphenol compounds derived from pistachios kernels (Pistacia vera L.). Plants, 2020. 9(2): p. 267.

30. Ali, A.N.M., N.A.-H.A.A. Saeed, and H.A. Omear, The Anticancer Properties of Artemisia aucheri Boiss Extract on HT29 Colon Cancer Cells. Journal of gastrointestinal cancer, 2020: p. 1-7.

31. Zamanian M.,et al. Antiviral effect of Artemisia aucheri aqueous extract on UL46 and US6 genes of HSV- 1.Antiviral Therapy,Accepted 2021

 

 

 

 

 

Type of Study: Research Article | Subject: Genetics
Received: 2021/09/11 | Accepted: 2021/09/1 | Published: 2021/09/1

Add your comments about this article : Your username or Email:
CAPTCHA

Rights and permissions
Creative Commons License This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

© 2024 CC BY-NC 4.0 | New Cellular and Molecular Biotechnology Journal

Designed & Developed by : Yektaweb