دوره 2، شماره 8 - ( 7-1391 )                   جلد 2 شماره 8 صفحات 79-87 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه ، واحد علوم و تحقیقات ، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران ، skhalighfard96@gmail.com
چکیده:   (27352 مشاهده)

اهداف: آنزیم I CEL یک گلیکوپروتئین گیاهی است که از گیاهان دسته کرفس استخراج می شود و اولین آنزیم یوکاریوتی است که پیوند ناجور را با یک اختصاصیت بالا در یکی از دو رشته DNA برش می دهد. هدف از این پژوهش کلون کردن ژن، بیان و تخلیص آنزیم CEL I اندونوکلئاز و بررسی عملکرد آن بر روی ژنهای جهش یافته در محیط آزمایشگاهی بوده است.

مواد و روش ها: در این تحقیق از گیاه کرفس mRNA استخراج شد و سپس RT-PCR صورت گرفت و محصول به عنوان الگودر تکثیر PCR مورد استفاده قرار گرفت. ژن در پلاسمید بیانی pET32a ساب کلون شد و درون باکتری E.coli سویه BL2I( DE3) plysS ترانسفورم گردید. پروموتور ژن با IPTG القا شد و با وسترن بلاتینگ مورد بررسی قرار گرفت. پروتئین با ستون کروماتوگرافی تمایلی ( S.Tag / His.Tag ) تخلیص شد. همچنین فعالیت اندونوکلئازی آنزیم روی محصول PCR ژن جهش یافته و نرمال در حال بررسی می باشد. 

یافته ها: کلونینگ ژن با موفقیت انجام شد، پروتئین نوترکیب تخلیص شد و نتایج اولیه نشان دادند که آنزیم می تواند نواحی هترودوبلکس ژن را شناسایی کند.

نتیجه گیری: آنزیم CEL I نوترکیب می تواند نواحی هترودوبلکس راشناسایی نماید.

متن کامل [PDF 520 kb]   (4733 دریافت)    
نوع مطالعه: مقاله تحقیقی | موضوع مقاله: ژنتیک
دریافت: ۱۳۹۱/۱۰/۲