TY - JOUR JF - NCMBJ JO - NCMBJ VL - 2 IS - 8 PY - 2012 Y1 - 2012/10/01 TI - Cloning, Expression and Purification CEL I Endonuclease Enzyme from Celery Plants TT - کلونینگ، بیان ژن وتخلیص آنزیم CEL Iاندونوکلئاز از گیاه کرفس N2 - اهداف: آنزیم I CEL یک گلیکوپروتئین گیاهی است که از گیاهان دسته کرفس استخراج می شود و اولین آنزیم یوکاریوتی است که پیوند ناجور را با یک اختصاصیت بالا در یکی از دو رشته DNA برش می دهد. هدف از این پژوهش کلون کردن ژن، بیان و تخلیص آنزیم CEL I اندونوکلئاز و بررسی عملکرد آن بر روی ژنهای جهش یافته در محیط آزمایشگاهی بوده است. مواد و روش ها: در این تحقیق از گیاه کرفس mRNA استخراج شد و سپس RT-PCR صورت گرفت و محصول به عنوان الگودر تکثیر PCR مورد استفاده قرار گرفت. ژن در پلاسمید بیانی pET32a ساب کلون شد و درون باکتری E.coli سویه BL2I( DE3) plysS ترانسفورم گردید. پروموتور ژن با IPTG القا شد و با وسترن بلاتینگ مورد بررسی قرار گرفت. پروتئین با ستون کروماتوگرافی تمایلی ( S.Tag / His.Tag ) تخلیص شد. همچنین فعالیت اندونوکلئازی آنزیم روی محصول PCR ژن جهش یافته و نرمال در حال بررسی می باشد. یافته ها: کلونینگ ژن با موفقیت انجام شد، پروتئین نوترکیب تخلیص شد و نتایج اولیه نشان دادند که آنزیم می تواند نواحی هترودوبلکس ژن را شناسایی کند. نتیجه گیری: آنزیم CEL I نوترکیب می تواند نواحی هترودوبلکس راشناسایی نماید. SP - 79 EP - 87 AU - Kaligh, Solmaz AU - Bandehpour, Mojgan AU - Yassaee, Vahid reza AU - Parivar, Kazem AU - Kazemi, Bahram AD - Department of Biology, Faculty of Sciences, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran KW - CELI endonuclease enzymes KW - western blotting KW - plasmid pET32a KW - recombinant proteins KW - affinity chromatography UR - http://ncmbjpiau.ir/article-1-259-fa.html ER -