fa مقایسه روش‌های مختلف استخراج RNA در برگ سیب (Malus domestica) ژنتیک Genetics مقاله پژوهشی Research Article <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">سابقه و هدف</span></span></strong><strong><span style="font-family:b nazanin;">:</span></strong> <span style="font-family:b nazanin;">جداسازی</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;"> RNA </span></span><span style="font-family:b nazanin;">از گیاهانی که دارای مقدار زیادی ترکیبات پلی‌ساکارید و پلی‌فنل می‌باشند به علت اتصال و رسوب این ترکیبات با</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;"> RNA </span></span><span style="font-family:b nazanin;">&nbsp;مشکل است. بنابراین در این مطالعه 11 پروتکل مختلف استخراج</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">RNA </span></span><span style="font-family:b nazanin;">&nbsp;از برگ‌های سیب &nbsp;غنی از ترکیبات فنلی مورد بررسی قرار گرفت.</span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">مواد و روش ها</span></span></strong>: <span style="font-family:b nazanin;">کیفیت و کمیت </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">&nbsp;RNA</span></span><span style="font-family:b nazanin;">با الکتروفورز ژل آگارز 1.2% و اسپکتروفتومتری نانودراپ در طول موج 230، 260 و 280 نانومتر تعیین شد و سنتز</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;"> cDNA </span></span><span style="font-family:b nazanin;">و آنالیز</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;"> RT-PCR </span></span><span style="font-family:b nazanin;">&nbsp;با پرایمر اختصاصی ژن اکتین سیب انجام گرفت.</span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">یافته&shy; ها</span></span></strong>: <span style="font-family:b nazanin;">نتایج نشان داد که روش استخراج جمی‌چات‌چائو و همکاران (2012) و راجاکانی و همکاران (2013) مناسب‌ترین روش‌های استخراج</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">RNA </span></span><span style="font-family:b nazanin;">&nbsp;از برگ سیب بودند. عملکرد</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;"> RNA </span></span><span style="font-family:b nazanin;">کل استخراج شده در این روش‌ها به ترتیب بین 152.4 تا 800.2 و 362.1 تا 452.6 نانوگرم در میکرولیتر به دست آمد. باندهای </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">S</span></span><span style="font-family:b nazanin;">18 و </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">S</span></span><span style="font-family:b nazanin;">28</span> <span style="font-family:b nazanin;">در الکتروفورز افقی مشاهده شدند.</span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">بحث:</span></span></strong> &nbsp;<span style="font-family:b nazanin;">در هر دو روش نسبت 260 به 280 و 260 به 230 به ترتیب بین 1.99 تا 2.03 و 2.07 تا 2.17 بود که نشان دهنده</span> <span style="font-family:b nazanin;">خلوص بالای</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">RNA </span></span><span style="font-family:b nazanin;">&nbsp;و عدم آلودگی به پلی‌فنلی، پروتئینی و پلی‌ساکاریدی می‌باشد. </span><br> <strong><span style="font-family:b nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">نتیجه‌گیری:</span></span></strong> <span style="font-family:b nazanin;">کیفیت بالای واکنش</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;"> RT-PCR </span></span><span style="font-family:b nazanin;">در هر دو روش نشان داد که</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;"> RNA </span></span><span style="font-family:b nazanin;">استخراج شده می‌تواند با اطمینان جهت آزمایش‌های مولکولی پائین دستی مورد استفاده قرار گیرد</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">.</span></span> Aim and Background: RNA isolation is difficult in plant that contain large amounts of polysaccharides and polyphenol compounds that bind and co-precipitate with RNA. Therefore, in this study eleven different methods were evaluated to extract RNA from leaves of apple rich in phenolic compounds. Material and methods:The quantity and quality of extracted RNA were determined by 1.2% nano-drop spectrophotometric at absorbance of 230, 260 and 280nm, agarose gel electrophoresis and cDNA synthesis and RT-PCR analysis by specific primer for apple Actin were performed . Results:The results indicated that methods of Djami-Tchatchou et al., (2012) and Rajakani et al.,(2013) were the most suitable methods for RNA extraction from apple leaves. The yield of total RNA extracted by these methods varies from 753.6 to 800.2 and 362.1 to 452.6 ng/µl in apple leaves , respectively. Distinct bands of 28S and 18S ribosomal RNA were observed in electrophoresis Discuss: In two protocols, ratios of A260/A280 and A260/A230 ranged from 1.99 to 2.03 and from 2.07 to 2.17, respectively This is indicative of a high RNA purity and the absence of contamination with polyphenolic, protein and polysaccharide compounds Conclusion: The high quality for RT-PCR reaction by two methods showed the extracted RNA can be used with assurance in downstream molecular techniques. جداسازی RNA, سیب, RT-PCR. Priming, Salinity Stress, Germination, Cucumber 55 62 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-1009-2&slc_lang=fa&sid=1 Shahram Montazeri شهرام منتظری 10031947532846007521 10031947532846007521 Yes Department of Plant Breeding, Khuzestan Science and research Branch, Islamic Azad University, Ahvaz, Iran. گروه اصلاح نباتات، پردیس علوم و تحقیقات خوزستان، دانشگاه آزاد اسلامی، اهواز، ایران Shahab Sadat شهاب سادات 10031947532846007522 10031947532846007522 No Department of Plant Breeding, Ahvaz Branch, Islamic Azad University, Ahvaz, Iran گروه اصلاح و نباتات، واحد اهواز، دانشگاه آزاد اسلامی، اهواز، ایران