New Cellularand Molecular Biotechnology Journal

fa تشخیص مولکولی باکتری سالمونلا در نمونه های شترمرغ‌ در استان کرمان-شهرستان سیرجان به روش PCR Molecular detection of Salmonella bacteria isolated by PCR from ostriches samples in Sirjan district of Kerman province سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article سابقه و هدف: سالمونلوز یکی از بیماری‌های مهم مشترک بین انسان و حیوان است که پراکندگی جغرافیایی بسیار وسیعی دارد. از مهمترین منابع آلودگی سالمونلا در انسان سبزی‌ها، فرآورده‌های لبنی، محصول‌های دریایی، مواد گوشتی بهویژه گوشت ماکیان، تخممرغ و فرآورده‌های جانبی آن‌ها است. روشهای استاندارد مبتنی بر کشت باکتری برای تشخیص گونههای سالمونلا حساس ولی زمانبر است. PCR از حساسیت و دقت بالایی برای شناسایی عوامل عفونی برخوردار است. ژن hilA از ژن‌های رمز کننده پروتئین‌های تنظیم کننده نسخهبرداری و از ژنهای با حفاظت ژنتیکی بالا است که می‌توان از آن در جهت شناسایی سالمونلا بهره برد. هدف از این تحقیق، شناسایی باکتری سالمونلا در مدفوع شترمرغ‌ بر پایه وجود ژن hilA به کمک روش PCR و بررسی اختصاصیت این روش در مقایسه با روش‌های متداول است. مواد و روشها: 500 نمونه از مدفوع شترمرغ‌های منطقه سیرجان که پیشتر برای تشخیص سویه‌های سالمونلایی مورد بررسی‌ کشت‌های افتراقی و تست‌های بیوشیمیایی قرار گرفته بود برای آزمون حضور ژن hilA استفاده شد. DNA باکتری‌ها از نمونه‌های مدفوع شترمرغ‌ها بعد از حل کردن مدفوع در محیط کشت و 24 ساعت نگهداری در دمای 37 درجه سلسیوس، استخراج گردید و به کمک PCR و استفاده از پرایمرهای اختصاصی جهت بررسی حضور ژن hilA مورد ارزیابی قرار گرفتند. یافته ها: بررسی وجود ژن hilA از میان 500 نمونه مدفوع نشان داد که در 38 نمونه مدفوع، باکتری سالمونلا حضور دارد که با نتایج آزمون استاندارد برای شناسایی سالمونلا مطابقت داشت. قابل ذکر است که نتایج حاصل از بررسی ژن hilA در همان نمونه‌هایی مثبت بود که حضور باکتری سالمونلا قبلا توسط آزمون‌های استاندارد تأیید گردیده بود. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده نشان می‌دهد که بررسی ژن hilA با استفاده از PCR و پرایمرهای اختصاصی می‌تواند روشی جایگزین با سرعت و دقت بالا و هزینه بهنسبت پایین برای تشخیص باکتری سالمونلا در میان نمونه‌های مدفوع پرندگان باشد. با توجه به این‌که شیوع عفونت‌های سالمونلایی در میان پردنگان و ماکیان بهنسبت بالا است شناسایی این عفونت‌ها با سرعت و دقت بالا اهمیتی ویژه‌ای دارد. این مطالعه نشان داد که بررسی ژن hilA با استفاده از روش PCR می‌تواند در این زمینه مؤثر باشد.    Aim and Background: Salmonellosis is one of the major common human and animal diseases with wide geographical distribution. The most important sources of Salmonella infection in humans are vegetables, dairy products, marine products, meat products (especially poultry meat), and eggs and their products. Standard methods for the detection of Salmonella species are sensitive but time consuming. Therefore, faster methods in this field are required. PCR is a sensitive and specific method for identification of infectious agents. HilA as a highly protected encoding transcription regulation gene can be used for confirmation of Salmonella. The aim of this study is the identification of Salmonella bacteria in ostrich feces by investigation of hilA gene in genomic DNA using PCR and also evaluation of its specificity in comparison with other common techniques.   Material and methods: 500 ostrich feces samples that have previously been investigated for Salmonella by differential-selective cultivation and biochemical tests were used for study of hilA gene presence test. DNA was extracted from feces samples after solvation of feces in culture medium and incubation in 37 ˚C for 24 hours. Then, PCR was performed by hilA specific primers to investigate presence of hilA gene.   Results: The investigation of presence of hilA gene among 500 Sirjan’s ostrich feces samples showed that there are 38 feces samples infected by Salmonella which was in agreement with the results of standard tests for Salmonella. It is noteworthy to mention that hilA gene was present in those samples that Salmonella had been identified by standard tests. Conclusion: The results showed that the investigation of hilA gene by PCR using specific primers could be an alternative method for recognition of Salmonella in poultry facet with high accuracy and speed, and also low costs.     سالمونلا, شترمرغ, ژنhilA, PCR Salmonella, ostrich, hilA gene, PCR 31 38 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-1048-5&slc_lang=fa&sid=1