New Cellularand Molecular Biotechnology Journal

fa بهبود فعالیت و پایداری آنزیم OPH با استفاده از روش DNA شافلینگ Improving the activity and stability of OPH enzyme using DNA Shuffling method سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article سابقه و هدف: از جمله روشهای مؤثر برای مهندسی پروتئین، بهویژه برای بهبود قابلیتهای سویه های صنعتی، روش ژنوم شافلینگ است. این مطالعه منطبق بر تکنیکهای مهندسی بیوکاتالیستی و بر اساس روش های DNA شافلینگ انجام شده است. مواد و روشها: سویۀ وحشی سودوموناس آئروژینوزا به شماره دسترسی JQ917006.1 تهیه گردید. سویه های جهش یافته بهروش DES و سازگاری با غلظت دیازینون بررسی شدند. پس از آماده سازی پروتوپلاست، برزدن ژنوم انجام شد که از کتابخانۀ جهش یافته حاصل شده بود. پروتوپلاستهای الحاقی از نظر فعالیت بررسی شدند. یافتهها: فعالیت مربوط به سویه های IR1.G1، IR1.D8، IR1.D4 و IR1.D5 به ترتیب عبارتند از ۲۳۴/۰ U/ml، ۱/۰  U/ml، ۰۹۸/۰ U/ml و ۰۶۶/۰ U/ml و سویه های IRL1.F2 و IRL1.F3 و IRL1.F1 بهترتیب دارای فعالیت mg/L ۵۴۱/۰، mg/L ۵۲۳/۰ و mg/L ۵۰۹/۰ هستند. نتیجه گیری: نتایج حاصل از ارزیابی نسل اول ژنوم شافلینگ (دور اول فیوژن پروتوپلاست) نشان داد که سویه های برخورده (شافل شده) که قادر به رشد در مجاورت توکسین (۳۰۰۰ میلی لیتر در لیتر غلظت دیازینون) بودند، فعالیت بهتری نسبت به سویه های جهش یافته با استفاده از هر دو روش (گرادیان غلظت سم و روش DES) را از خود نشان دادند. <div>Aim and background: One of the effective methods for protein engineering, especially for improving the capabilities of industrial strains, is the genome shuffling method. This study is based on biocatalytic engineering techniques and DNA shuffling methods. Materials and Methods: Pseudomonas aeruginosa wild strain was prepared under the access number JQ917006.1. Mutant strains were evaluated by DES method and compatibility with diazinon concentration. After the protoplast was prepared, the genome was mutated from the mutant library. Fused protoplasts were evaluated for activity. Results: The activities related to IR1.G1, IR1.D8, IR1.D4 and IR1.D5 strains are 0.234 U/ml, 0.1 U/ml, 0.098 U/ml and 0.066 U/ml, respectively, and IRL1.F2, IRL1.F3 and IRL1.F1 strains have activities of 0.541 mg/L, 0.523 mg/L and 0.509 mg/L, respectively.</div> Conclusion: The results of evaluation of the first generation of genome shuffling (first round of protoplast fusion) showed that the shuffled strains that were able to grow in the presence of toxin (3000 ml/L diazinon concentration) had better activity than the obtained strain through both methods (toxin concentration gradient and DES method). ژنوم شافلینگ, سویه‌های بهبود یافته, مهندسی پروتئین, دیازینون, IAU science Genome shuffling, improved strains, protein engineering, diazinon, IAU science. 91 102 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-1444-2&slc_lang=fa&sid=1 Morteza Mirzaei مرتضی میرزایی 100319475328460012418 100319475328460012418 Yes Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران، ایران Mona Rastegar Shariat Panahi مونا رستگار شریعت پناهی 100319475328460012419 100319475328460012419 No Department of Biochemistry, Payame Noor University, Tehran, Iran گروه بیوشیمی، دانشگاه پیام نور، تهران، ایران Enayat Ghahremani عنایت قهرمانی 100319475328460012420 100319475328460012420 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران، ایران Ehsan Rezae احسان رضایی 100319475328460012421 100319475328460012421 No Molecular Biology Research Center, Systems biology and poisonings Institute, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات زیست‌شناسی مولکولی، انستیتوی زیست‌شناسی و مسمومیت‌ها، دانشگاه علوم پزشکی بقیه‌الله، تهران، ایران Rezvan Seid Moradi رضوان صید مرادی 100319475328460012422 100319475328460012422 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران، ایران Gholamreza Farnoosh غلامرضا فرنوش 100319475328460012423 100319475328460012423 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران، ایران Ali Mohammad Latifi علی محمد لطیفی amlatifi290@gmail.com 100319475328460012424 100319475328460012424 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، تهران، ایران