fa تولید دمین نوترکیب متالوپروتئیناز ایکارین به عنوان فعال کننده اصلی پروترومبین در سلول HEK293 سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">سابقه و هدف: </span></span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">امروزه بیماران زیادی به دلیل نقص یا عدم عملکرد فاکتورهای انعقادی و استفاده از انواع داروهای رقیق‌کننده خون درگیر اختلالات انعقادی بوده و نیازمند بررسی کل پروترومبین و تعیین مقدار بازدارنده‌های مستقیم ترومبین می‌باشند. با وجود مطالعه روی ایکارین سم مار جعفری، به عنوان یک فعال‌کننده مستقیم پروترومبین، هنوز در مورد مکان فعال این آنزیم تحقیق و بررسی انجام نشده است</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">.</span></span><br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">مواد و روش‌ها</span></span></strong>: <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">دمین متالوپروتئیناز ایکارین با طول 639 جفت باز در وکتور </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">pcDNA3.1</span></span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">سنتز گردید و پلاسمید یوکاریوتی نوترکیب به رده سلولی</span></span> <span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">HEK293</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> انتقال یافت. با استفاده از روش‌ </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">SDS-PAGE</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> بیان پروتئین مورد ارزیابی قرار گرفت و عملکرد آن در واکنش با پروترومبین و با استفاده ازتست زمان پروترومبین سنجیده شد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">یافته‌ها:</span></span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> نتایج نشان داد که دمین متالوپروتئیناز ایکارین تولید شده در سیستم بیانی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">HEK293</span></span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">، مانند ایکارین کامل، قادر به تولید ترومبین از پروترومبین است. اما در مقایسه با پروتئین مشابه تولید شده در سیستم پروکاریوتی، شروع فعالیت آن آهسته بود.</span></span><br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:14.0pt;">نتیجه‌گیری:</span></span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> دراین بررسی دمین متالوپروتئینازی ایکارین که به صورت نوترکیب در سلول</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">‌‌</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">‌های </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">HEK293</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"> تولید گردید، همانند ایکارین کامل قادر به فعال کردن پروترومبین به ترومبین بود و برای اولین‌بار به عنوان یک جایگزین مناسب برای هر دو نوع ایکارین طبیعی و نوترکیب در روش‌های مبتنی بر تبدیل پروترومبین به ترومبین معرفی شد. </span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;"></span></span> <strong>Aim and Background</strong>: Today, many patients with coagulation disorders due to defective or non-functioning coagulation factors and the use of various blood thinners need to check their prothrombin total and quantify determination of direct thrombin inhibitors. Despite the study of the ecarin from <em>Echis carinatus</em> venom as a direct activator of prothrombin, there have been not investigations into the active site of this enzyme.<br> <strong>Material and methods</strong>: Ecarin metalloproteinase domain (639 bp) was synthesized into the pcDNA3.1. Recombinant plasmid was transfected into HEK293 cell line. Protein expression was evaluated using SDS-PAGE and its function in reaction with prothrombin and using a prothrombin time test was measured.<br> <strong>Results:</strong> The results showed that the metalloproteinase domain of ecarin produced in the HEK293, like whole ecarin, was able to activate prothrombin to thrombin; but its activity was slow than one produced in the prokaryotic system.<br> <strong>Conclusion:</strong> In this study, the recombinant ecarin metalloproteinase produced in HEK293 cells, like whole ecarin, was able to activate prothrombin to thrombin and was introduced for the first time as a suitable alternative to both natural and recombinant ecarin in methods based on prothrombin to thrombin conversion. <strong><span dir="RTL"></span></strong> ایکارین, دمین متالوپروتئیناز, مکان فعال,سلول‌هایHEK293 ,, Iau Science. Ecarin, Metalloproteinase domain, Active site, HEK293 cells, Iau Science 39 45 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-36-6&slc_lang=fa&sid=1 Nasrin Mohammadi نسرین محمدی 100319475328460011972 100319475328460011972 Yes Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست‌شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Mojgan Bandehpour مژگان بنده‌پور 100319475328460011973 100319475328460011973 No Department of Biotechnology, School of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه بیوتکنولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران Fattah Sotoodehnejadnematalahi فتاح ستوده‌نژاد نعمت‌اللهی 100319475328460011974 100319475328460011974 No Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست‌شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Bahram Kazemi بهرام کاظمی bahram_14@yahoo.com 100319475328460011975 100319475328460011975 No Department of Biotechnology, School of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه بیوتکنولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران