fa طراحی و تهیه وکتور یوکاریوتی حامل ساختار فیوژن پلی اپی توپی L1-E7 ویروسهای پاپیلومای انسانی پر خطر سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">چکیده</span></span></strong><strong><span dir="LTR"><span style="font-size:14.0pt;"></span></span></strong><br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">سابقه و هدف:</span></span></strong> <span style="font-family:B Nazanin;">آلودگی به </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">HPV</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"> به&shy;عنوان اصلی‌ترین دلیل سرطان دهانه رحم شناخته می‌شود. این سرطان در دنیا، چهارمین سرطان شایع در میان زنان است. طراحی </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">DNA</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"> واکسنی که علاوه&shy;بر پیشگیری، ویژگی‌های درمانی نیز داشته باشد می‌تواند در کاهش ابتلا و مرگ و میر تأثیر چشمگیری داشته باشد. </span><br> &nbsp;<br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">مواد و روش‌ها:</span></span></strong> <span style="font-family:B Nazanin;">توالی ژنی شامل اپی&shy;توپ&shy;های ایمونوژنیک و حفاظت شده پروتئین‌های </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">L1</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;">و </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">E7</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"> ویروس&shy;های پاپیلومای انسانی پر خطر طراحی گردید. پس از سنتز ساختار فیوژن </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">L1-E7</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"> در وکتور کلونینگ </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">pUC57</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">،</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;">ساب کلون کردن آن در وکتور یوکاریوتی</span> <span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">pcDNA3.1(-)</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;">انجام شد. غلظت و خلوص پلاسمید نوترکیب </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">pcDNA-L1E7</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;">توسط اسپکتروفتومتری نانودراپ تعیین شد.&nbsp; &nbsp;</span><br> &nbsp;<br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">یافته‌ها:</span></span></strong> <span style="font-family:B Nazanin;">توالی ژنی موردنظر پس از برش از </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">pUC57-L1E7</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"> توسط آنزیم&shy;های محدود الاثر </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">BamH</span></span></em><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">I/<em>Hind</em>III</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><span style="font-family:B Nazanin;">در جایگاه مشابه وکتور</span> <span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">pcDNA3.1(-)</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;">ساب کلون شد. تأیید حضور ژن در وکتور توسط هضم آنزیمی با</span> <em><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">BamH</span></span></em><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">I/<em>Hind</em>III</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">، </span></span><span style="font-family:B Nazanin;">قطعه 639 جفت بازی مربوط به ژن را روی ژل آگارز 1 درصد نشان داد</span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:10.0pt;">. </span></span><span style="font-family:B Nazanin;">پلاسمید نوترکیب</span> <span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">pcDNA-L1E7</span></span> <span style="font-family:B Nazanin;">توسط کیت استخراج فاقد اندوتوکسین به</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span></span><span style="font-family:B Nazanin;">منظور جداسازی لیپوپلی</span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">&shy;</span></span><span style="font-family:B Nazanin;">ساکارید باکتری تخلیص شد. غلظت </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">DNA</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"> تخلیص شده، حدود 1474 نانوگرم/ میکرولیتر به&shy;دست آمد. </span><br> &nbsp;<br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">نتیجه‌گیری:</span></span></strong> <span style="font-family:B Nazanin;">کلونینگ ساختار فیوژن </span><span dir="LTR"><span style="font-size:11.0pt;">L1-E7</span></span><span style="font-family:B Nazanin;"> در وکتور یوکاریوتی با موفقیت انجام گرفت. در مراحل بعدی از وکتور نوترکیب برای تحقیقات درون تنی واکسن ژنی</span> <span style="font-family:B Nazanin;">استفاده خواهد شد. </span><br> &nbsp;<br> &nbsp; <strong>Abstract</strong><strong>:</strong><br> <strong>Aim and Background: </strong>Human Papillomaviruses (HPV) infection was known to be the leading cause of cervical cancer. Cervical cancer is the fourth most common cancer among women in the world. Designing a DNA vaccine with therapeutic properties as well as prevention can have a significant impact on reducing morbidity and mortality.<br> <strong>Materials and Methods: </strong>Gene sequences including the immunogenic and conserved epitopes of L1 and E7 proteins of high risk papillomaviruses were designed. After synthesis of the L1-E7 fusion construct in pUC57 cloning vector, its subcloning was performed in pcDNA3.1 (-) eukaryotic vector. The concentration and purity of the recombinant pcDNA-L1E7 plasmid was determined by NanoDrop spectrophotometry. &nbsp;<br> <strong>Results: </strong>The gene sequence after cutting from pUC57-L1E7 by <em>Bam</em>HI/<em>Hind</em>III restriction enzymes, was subcloned in the same cloning site of pcDNA3.1 (-) vector. The presence of gene was confirmed by digestion with <em>Bam</em>HI/<em>Hind</em>III enzymes, as a 639 bp fragment on 1% agarose gel. The recombinant pcDNA-L1E7 plasmid was purified by endotoxin-free extraction kit for isolation of bacterial lipopolysaccharide. The concentration of the purified DNA was obtained about 1474 ng/ &micro;l.<br> <strong>Conclusion: </strong>Cloning of the L1-E7 fusion construct in the eukaryotic vector was successful. In the next steps, the recombinant vector will be used for gene vaccine studies<em> in vivo</em>.&nbsp; ویروس پاپیلومای انسانی, پروتئین‌ L1, پروتئین E7, وکتور بیان یوکاریوتی,.Iau Science Human papillomavirus, L1 protein, E7 protein, Eukaryotic expression vector , Iau Science. 95 106 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-492-3&slc_lang=fa&sid=1 Elnaz Abbasifarid الناز عباسی‌فرید 100319475328460012327 100319475328460012327 No Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست‌شناسی، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Azam Bolhassani اعظم بوالحسنی .bolhassani@yahoo.com 100319475328460012328 100319475328460012328 No Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش هپاتیت و ایدز، انستیتوپاستور ایران، تهران، ایران Shiva Irani شیوا ایرانی 100319475328460012329 100319475328460012329 Yes Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست‌شناسی، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Fattah Sotoodehnejadnematalahi فتاح ستوده‌نژاد نعمت‌الهی 100319475328460012330 100319475328460012330 No Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست‌شناسی، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران