fa بهینه سازی تولید زنجیره سبک آنزیم انتروکیناز انسانی به منظور استفاده در صنایع دارویی ژنتیک Genetics مقاله پژوهشی Research Article <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">سابقه و هدف: </span></span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">انتروکیناز یک آنزیم دستگاه گوارش است که به عنوان یک پروتئاز با توالی خاص عمل می کند. به دلیل توانایی انتروکیناز برای هضم آنزیمی پروتئین نوترکیب در سایت اختصاصی آن (شامل چهار اسید آمینه آسپارتیک اسد و یک اسید آمینه لیزین می باشد) که در پروتئین هدف قرار داده می شود، به عنوان یک ابزار بسیار مفید برای امکان خالص سازی و جداسازی بخش پروتئین هدف از بخش غیر هدف در صنایع دارویی، غذایی و صنعتی مورد استفاده قرار می گیرد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">مواد و روش&shy;ها: </span></span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">متغیرهای مستقل مورد استفاده شامل میزان </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">OD</span></span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">(6/0، 2/1 و 8/1) در طول موج 600 نانومتر، غلظت </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">IPTG</span></span></span> &nbsp;<span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">(2/0، 5/0 و 8/0 میلی مولار) و نوع سویه باکتری (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">ShuffleT7, BL21, NICO21</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">) بود. از روش سطح پاسخ (</span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">RSM</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">) در قالب طرح مرکب مرکزی برای پیش بینی متغیرهای مستقل بر میزان تولید آنزیم انتروکیناز استفاده شد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">یافته&shy; ها: </span></span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">میزان </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">OD</span></span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">برابر با 8/1 در طول موج 600 نانومتر، غلظت </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">IPTG</span></span></span> <span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">71/0 میلی مولار و نوع سویه باکتری </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">ShuffleT7</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">، محیط کشت </span></span><span dir="LTR"><span style="font-family:Times New Roman,serif;"><span style="font-size:10.0pt;">LB</span></span></span><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">، غلظت لاکتوز 5/2 میلی مولار و دمای القاء 25 درجه سانتیگراد، برای تولید آنزیم انتروکیناز نوترکیب بهینه سازی شد.</span></span><br> <strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:16.0pt;">بحث و نتیجه گیری: </span></span></strong><span style="font-family:B Nazanin;"><span style="font-size:12.0pt;">پروتئین&shy;های دارویی نقش مهمی در درمان&shy;های نوین پزشکی مولکولی دارند. بیان ژن انتروکیناز در سیستم باکتریایی، تسهیل در خالص سازی غلظت هایی که پایین است را فراهم می کند، بنابراین پروتئین های نوترکیب در مقیاس وسیع و با خلوص زیاد می توانند در سیستم باکتریایی تولید و بهینه سازی شوند.</span></span> <strong>Aim and Background: </strong>Enterokinase is a gastrointestinal enzyme that acts as a protease with a specific sequence. Due to the ability of enterokinase to enzymatically digest the recombinant protein at its specific site (including the four amino acids Aspartic acid and one amino acid lysine), which is targeted at the protein, as a very useful tool for purification and separation Target protein from the non-target part is used in the pharmaceutical, food and industrial industries.<br> <strong>Materials and Methods: </strong>Independent variables used included OD (0.6, 1.2 and 1.8) at 600 nm, IPTG concentration (0.2, 0.5 and 0.8 mM) and The type of bacterial strain was (ShuffleT7, BL21, NICO21). The response surface methodology (RSM) in the form of a central composite scheme was used to predict independent variables on the production of enterokinase enzyme.<br> <strong>Results: </strong>OD equal to 1.8 at 600 nm wavelength, IPTG concentration of 0.71 mM and type of ShuffleT7 bacterial strain, LB culture medium, 2.5 mM lactose concentration and 25 &deg; C induction temperature, for production Recombinant enterokinase was optimized.<br> <strong>Discussion and Conclusion: </strong>Drug proteins play an important role in modern molecular medicine therapies. Enterokinase gene expression in the bacterial system facilitates the purification of low concentrations, so large-scale, highly purified recombinant proteins can be produced and optimized in the bacterial system. انتروکیناز, القاگر پروموتر, خالص سازی, کلونینگ, میزبان بیانی. Iau Science . Enterokinase, Promoter inductor, Purification, Cloning, Expression host. Iau Science . 113 127 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-1717-2&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Ebrahimifard محمد ابراهیمی فرد 100319475328460012680 100319475328460012680 No Department of Biology, Damghan Branch, Islamic Azad University, Damghan, Iran. گروه زیست شناسی، واحد دامغان، دانشگاه آزاد اسلامی، دامغان، ایران. Mohammad Mahdi Forghanifard محمد مهدی فرقانی فرد forghanifard@gmail.com 100319475328460012681 100319475328460012681 No Department of Biology, Damghan Branch, Islamic Azad University, Damghan, Iran. گروه زیست شناسی، واحد دامغان، دانشگاه آزاد اسلامی، دامغان، ایران. Ahad Yamchi احد یامچی 100319475328460012682 100319475328460012682 Yes Department of Biotechnology, Golestan University, Gorgan, Iran. گروه بیوتکنولوژی، دانشگاه علوم کشاوزی و منابع طبیعی گرگان، گرگان، ایران. Vajihe Zarrinpur وجیهه زرین پور 100319475328460012683 100319475328460012683 No Department of Biology, Damghan Branch, Islamic Azad University, Damghan, Iran. گروه زیست شناسی، واحد دامغان، دانشگاه آزاد اسلامی، دامغان، ایران.