New Cellularand Molecular Biotechnology Journal

fa بررسی موتاسیون های ژن rpoB مایکوباکتریوم توبرکلوزیس در سویه های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس جدا شده از بیماران شهر تهران Characterization of mutations in the rpoB gene of Mycobacterium tuberculosis isolated from Tehran City میکروبیولوژی Microbiology مقاله پژوهشی Research Article سابقه و هدف: مایکوباکتریوم توبرکلوزیس باکتری عامل بیماری سل است که سالانه حدود 2 میلیون نفر بر اثر ابتلا به این بیماری جان خود را از دست می دهند. وجود باکتری های مقاوم به دارو های ضد سلی از عوامل مهم مرگ افراد مبتلا به سل است. از جمله مهم ترین این داروها، داروی ریفامپیسین است که به نظر می رسد مکانیسم عملکرد این دارو، دخالت در فرایند رونویسی از طریق اتصال به زیرواحد β آنزیم RNA پلیمر از می باشد. مقاومت مایکوباکتریوم ها به این دارو در اثر جهش در ناحیه bp 81 ژن rpoB است که این ژن رمز کننده زیر واحد β آنزیم RNA پلیمراز می باشد. این تحقیق با هدف شناسایی نوع و فراوانی جهش های این ناحیه، در نمونه های شهر تهران صورت گرفت. مواد و روش ها: در این مطالعه 65 بیمار مبتلا به سل که پس از 6 ماه درمان با داروهای ضد سلی به درمان جواب نداده بودند، انتخاب شدند و از آن ها پس از اخذ رضایت، نمونه خلط گرفته شد. پس از کشت نمونه ها در محیط کشت جامد لون اشتاین جانسون و پس از انجام تست های حساسیت، نمونه های مقاوم به ریفامپیسین شناسایی شدند. ژن rpoB نمونه های مقاوم به ریفامپیسین تکثیر شد و توالی یابی گردید. نتایج توالی یابی توسط برنامه DNAMAN آنالیز گردید. یافته ها: در این تحقیق، 35 نمونه مقاوم به ریفامپیسین شناسایی گردید. آنالیز های کامپیوتری نشان داد که 14نمونه (70%) دارای جهش در ناحیه 81bp ژن rpoB مایکوباکتریوم توبرکلوزیس و 6 نمونه نیز فاقد هرگونه جهش در این ناحیه بودند. فراوان ترین جهش ها در کدون های 531 (40%) و 515 (20%) مشاهده گردید. جهش جدیدی نیز در کدون 515 در 5 سوش مشاهده گردید. جهش در کدون های 526 (10%) و 510 (15%) نیز مشاهده شد. نتیجه گیری: فراوان ترین جهش ها در نمونه های شهر تهران در کدون های 531 و 515 واقع شده اند. وجود جهش جدید در کدون 515 نشانگر الگوی متفاوت جهش در تهران می باشد. داده های ما 6 نمونه فاقد جهش در این ناحیه و چند نمونه دارای جهش در خارج از این ناحیه را نشان می دهد. این نتایج ما را به این نظریه می رساند که مقاومت مایکوباکتریوم توبرکلوزیس نسبت به داروی ریفامپیسین می تواند علاوه بر عوامل ژنتیکی دارای عوامل غیر ژنتیکی نیز باشد و یا ممکن است ژن های دیگری نیز در ایجاد مقاومت به ریفامپیسین نقش داشته باشند که با مطالعات اپیدمیولوژی مولکولی مطابقت دارد. Aim and Background. The aim of this study was to investigate the frequency, location and type of rpoB mutations in Mycobacterium tuberculosis isolated from patients in Tehran City. Materials and Methods. 65 sputums were collected from suspected tuberculosis patients, 35 Rif-r isolates were identified as Mycobacterium tuberculosis. PCR Amplification and DNA sequencing methods were performed. 411 bp fragments of rpoB gene were sequenced and mutations in 81 bp regions were analyzed. Results. 38 mutations were identified in 14 RIF-r MBT (70%). Missense mutations produced 38 types of amino acid substitutions. In 6 RIF-r MBT isolates (30%) no mutations were found in the core region of the rpoB gene. Most frequent mutations detected from Tehranian strains were in codons 531 and 515. Two alleles in codon 531 and one allele in all codons 526, 515, 510, 566, 490 and 476 were found. In the 6 isolates were identified 2 mutation in different codons and 8 strains harboured single mutations in codons . Conclusion. In this study, has been investigated the significance of mutations in the rpoB gene, its correlation with genotype and phenotype agents and high level of resistance to rifampicin in 14 isolates of M. tuberculosis collected from patients with active pulmonary tuberculosis from different geographic regions of Tehran. ریفامپیسین، مایکوباکتریوم توبرکلوزیس، ژن rpoB Mutations rpoB, MTB, Tehran. 17 25 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-2-11&slc_lang=fa&sid=1 Saeed Zaker Bostanabad سعید ذاکر بستان آباد saeedzaker20@yahoo.com 1003194753284600515 1003194753284600515 Yes Islamic Azad University, Parand branch, Biology and Microbiology Department دانشگاه آزاد اسلامی واحد پرند، دانشکده ی علوم زیستی، گروه زیست شناسی Esmaeil Jabbarzadeh اسماعیل جبارزاده 1003194753284600516 1003194753284600516 No Pasteur Institute of Iran, Mycobacteriology Department انستیتو پاستور ایران، بخش سل و تحقیقات ریوی Shahin Pourazar شاهین پور آذر 1003194753284600517 1003194753284600517 No Massoud Laboratory, Mycobacteriology Lab. آزمایشگاه مسعود، آزمایشگاه مایکوباکتریولوژی Mostafa Ghalami مصطفی قلمی 1003194753284600518 1003194753284600518 No Massoud Laboratory Complex, Mycobacteriology Lab. آزمایشگاه مسعود، آزمایشگاه مایکوباکتریولوژی وحید ملاکاظمی 1003194753284600519 1003194753284600519 No انستیتو پاستور ایران، بخش بانک سلولی