New Cellularand Molecular Biotechnology Journal

other ساخت وکتور بیانیِ حاملِ انکوژن E5 ویروس پاپیلومای انسانی و بررسی بیان آن در سیستم بیانیِ E. coli Construction of an Expression Vector Carrying the Human Papillomavirus Type 16 Oncogene E5 and Evaluation of Its Expression in an E. coli Expression System سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <p style="border-color: currentcolor rgb(0, 36, 101) rgb(0, 36, 101) currentcolor; border-style: none solid solid none; border-width: medium 1.5pt 1.5pt medium; padding: 0cm 4pt 1pt 0cm; text-align: justify;">زمینه و هدف: نقشِ کلیدیِ انکوپروتئین‌های ویروسِ پاپیلومای انسانیِ نوعِ 16 (HPV16) در شدتِ بیماری و حتی تشخیصِ زودهنگامِ سرطان‌های مرتبط با HPV16 بررسی شده است. هدف و تمرکزِ مطالعۀ حاضر روی کلونینگ و بیان یکی از انکوژن‌های ویروس تحتِ عنوانِ E5 در سیستم E. coli به‌منظور تخلیص و تعیینِ عملکردِ آن در آینده می‌باشد. مواد و روش‌ها: در این پژوهش، کلون کردن ژنِ E5 ویروسِ پاپیلومای انسانی نوعِ 16 در وکتورِ بیانِ پروکاریوتی pET28a (plasmid expression T7) انجام شد. سپس، بیانِ پروتئینِ نوترکیبِ E5 در سیستمِ بیانیِ E. coli با استفاده از روش‌های SDS-PAGE و وسترن بلات موردبررسی قرار گرفت. نتایج: نتایج ما نشان دادند که ژنِ E5 کلون‌شده در وکتورِ بیانیِ pET28a (+) با اندازۀ 240 جفت‌باز، قادر به بیان در سیستمِ اشرشیاکلی سویۀ BL21 تحتِ شرایطِ دمای 37 درجۀ سانتی‌گراد، غلظتِ 5/0 میلی‌مولار IPTG و 18 ساعت پس از القاست. آنالیزِ SDS-PAGE و وسترن بلات حضور باندِ 10 کیلودالتونیِ مربوط به بیانِ پروتئینِ نوترکیبِ E5 را تأیید کردند. <p style="border-color: currentcolor rgb(0, 36, 101) rgb(0, 36, 101) currentcolor; border-style: none solid solid none; border-width: medium 1.5pt 1.5pt medium; padding: 0cm 4pt 1pt 0cm; text-align: justify;">نتیجه‌گیری: با توجه به بیانِ پروتئینِ E5 غنی از اسیدآمینه‌های آب‌گریز در سیستمِ بیانیِ باکتری و عدم‌نیاز به مدیفیکاسیون در این پروتئین نظیرِ فسفریلاسیون و گلیکوزیلاسیون، تخلیصِ پروتئینِ نوترکیب به‌منظورِ ارزیابیِ عملکردِ آن در طراحیِ واکسن در آینده صورت خواهد گرفت. <div style="border-color: currentcolor currentcolor rgb(0, 36, 101) rgb(0, 36, 101); border-style: none none solid solid; border-width: medium medium 1.5pt 1.5pt; padding: 0cm 0cm 1pt 4pt; text-align: justify;">Background and Aim: Human papillomavirus type 16 (HPV16) oncoproteins play a pivotal role not only in the severity of HPV-related diseases but also in the early diagnosis of virus-induced cancers. This study aimed to clone the HPV16 E5 oncogene into a prokaryotic expression vector and assess its expression in an Escherichia coli (E. coli) system, with the future goal of facilitating its purification and functional characterization. Materials and Methods: In this study, the HPV16 E5 gene was cloned into the pET28a prokaryotic expression vector (plasmid expression T7). Then, expression of the recombinant E5 protein was analyzed in the E. coli expression system using SDS-PAGE and western blotting techniques. Results: Our results showed that the E5 gene, which is approximately 240 base pairs in size and was cloned into the pET28a(+) vector, was expressed in E. coli BL21 under the following conditions: 37º C, 0.5 mM IPTG, and 18 hours post-induction. SDS-PAGE and western blot analysis confirmed a distinct protein band at approximately 10 kDa, consistent with the expected size of the recombinant E5 protein. Conclusion: The successful expression of the hydrophobic E5 oncoprotein in a bacterial system, despite the absence of post-translational modifications such as phosphorylation and glycosylation, suggests the purification of this protein for evaluation of its function in vaccine design in the future.</div> HPV16, انکوپروتئین E5, کلونینگ, بیان پروتئین نوترکیب , سیستم بیانی اشرشیاکلی HPV16, E5 oncoprotein, Cloning, Recombinant protein expression, Escherichia coli expression system, 63 73 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-1267-4&slc_lang=other&sid=1 Fahimeh Ezzatizadeh فهیمه عزتی زاده 100319475328460015903 100319475328460015903 No Department of Biology, SR.C., Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست‌شناسی سلولی‌ومولکولی، دانشکدۀ علوم و فناوری‌های همگرا، واحد علوم‌وتحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Azam Bolhassani اعظم بوالحسنی 100319475328460015904 100319475328460015904 Yes Department of Hepatitis, AIDS and Blood-borne Diseases, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش هپاتیت، ایدز و ویروس‌های منتقله از خون، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران Fattah Sotoodehnejadnematalahi فتاح ستوده نژاد نعمت اللهی 100319475328460015905 100319475328460015905 No Department of Biology, SR.C., Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست‌شناسی سلولی‌ومولکولی، دانشکدۀ علوم و فناوری‌های همگرا، واحد علوم‌وتحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Abolfazl Fateh ابوالفضل فاتح 100319475328460015906 100319475328460015906 No Department of Mycobacteriology and Pulmonary Research, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش سل و تحقیقاتِ ریوی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران