fa بررسی پروفیل آنزیمی باکتری باسیلوس آمیلولیکوئیفاسینس BEH 111 و تعیین ویژگی‌های آنزیم آلفا-آمیلاز تولید شده بوسیله این باکتری میکروبیولوژی Microbiology مقاله پژوهشی Research Article <p align="justify" style="direction: rtl"> <strong>سابقه و هدف.</strong> آمیلازها، یکی از آنزیم های عمده صنعتی هستند که حدود 25% از بازار جهانی آنزیم ها را به خود اختصاص می دهند. این آنزیم ها در صنایع مختلف مثل نساجی، کاغذ سازی، داروسازی و صنایع غذایی مانند شیرین سازی و فرآوری نشاسته، استفاده می شوند. تحقیقات بسیاری در ارتباط با کاربرد آنزیم های آمیلولیتیک تولید شده توسط اعضاء جنس باسیلوس، در زمینه های مهم تولید قند، آبجو، صنایع غذایی، شوینده ها انجام شده است. گستردگی کاربرد آنزیم های آمیلولیتیک ، موجب می شود که تحقیقات برای مشخص شدن ویژگی های آنزیم ها ادامه داشته باشد. به همین دلیل، در این پژوهش، بررسی روی پروفیل آنزیمی آمیلولیتیک باکتری بومی و تعیین ویژگی های آن انجام شد. </p><p align="justify" style="direction: rtl"><strong>مواد و روش ها.</strong> در این مطالعه، پروفیل آنزیمی باکتری <em>باسیلوس آمیلولیکوئیفاسینس BEH 111،</em> با استفاده از روش های، SDS PAGE، زایموگرام و TLCتعیین شد. وزن مولکولی آلفا-آمیلاز، با استفاده از روش SDS PAGE تخمین زده شد. جهت سنجش کمی فعالیت آنزیم α-آمیلاز، از معرف دی نیتروسالیسیلیک اسید (DNS) استفاده شد. بررسی ویژگی های آنزیم جهت تایین بیشیته فعالیت آنزیم با روش DNS در شرایط مختلف دما pH غلضت سوبسترا (نشاسته) و زمان اجرا شد. </p><p align="justify" style="direction: rtl"><strong>یافته ها.</strong> وزن مولکولی آلفا-آمیلاز، با استفاده از روش SDS PAGE، 55 کیلودالتون تخمین زده شد. جهت سنجش کمی فعالیت آنزیم α-آمیلاز، از معرف دی نیتروسالیسیلیک اسید (DNS) استفاده شد. بررسی ویژگی های آنزیم نشان داد که بیشیته فعالیت این آنزیم در 50 درجه سانتیگراد، pH 7، در حضور غلظت 2% از نشاسته، طی 90 دقیقه است. میزان فعالیت آنزیم در این شرایطU/L 8222 می باشد. </p><p align="justify" style="direction: rtl"><strong>نتیجه گیری.</strong> این مقدار بالای فعالیت آنزیم تولید شده توسط <em>باسیلوس آمیلولیکوئیفاسینس BEH 111،</em> می تواند از نظر اقتصادی شایان توجه باشد. علاوه بر این توانایی فعالیت آن در دمای 50 درجه سانتیگراد و بالاتر، استفاده از آن را در فرآیندهایی که در دماهای بالا انجام می شوند، امکان پذیر می کند. شرایط pH بهینه 6 تا7 ، جهت فعالیت بالای این آنزیم، امکان استفاده در فرآیندهایی مثل مایع سازی و ژلاتینه کردن نشاسته را ایجاد می کند. </p> <p> <strong>Aims and background.</strong> Amylases are one of the major industrial enzymes that occupy 25 % of the world enzyme market. These enzymes are used in many different areas, such as paper, textiles, pharmaceutical, food, starch saccharafication and processing industries. Much research has been carried out regarding application of amylolytic enzymes produced by the genus Bacillus, to the production of glucose and beverages, food and detergent industries. Because of the extensive applicability of amylolytic enzymes, research in relation to identification of these enzymes and their characteristic is continuously being carried out. Hence, the aim of this research was to investigate the amylolytic enzyme profile of a native Bacillus strain, and determine its enzyme characteristics. </p><p><strong>Materials and Methods.</strong> In this study, the enzymatic profile of the bacterium, Bacillus amyloliquefaciens BEH 111, was determined by using the SDS-PAGE, zymogram and TLC methods. Zymography and TLC were used to identify the amylolytic enzyme profile of the bacterium. The molecular weight of α-amylase was estimated by SDS-PAGE. The 3, 5-Dinitrosalisyclic acid (DNS) indicator was used to examine α-amylase activity, quantitatively. Investigation of enzyme characteristics and determination of maximal enzyme activity was carried by the DNS method, at different temperatures, pH values, substrate concentrations and time periods. </p><p><strong>Results.</strong> The molecular weight of α-amylase was estimated to be 55 kDa by SDS-PAGE. Investigation of enzyme characteristics showed that maximum α-amylase activity was achieved at a temperature of 50oC, pH 7, presence of 2% starch, during a 90 min time period. Enzyme activity obtained under these conditions was 8222 U/L. </p><p><strong>Conclusion.</strong> The high level of enzyme activity produced by B. amyloliquefaciens BEH 111 can thus be of commercial significance. Furthermore, by having activity at 50oC and above, makes it possible for this enzyme to be applied to processes that use high temperatures. The optimized pH levels of 6-7 that resulted in high enzyme activity can also allow the potential use of this enzyme in processes such as starch liquefaction and gelatinization. </p> باسیلوس آمیلولیکوئیفاسینسBEH 111، کروماتوگرافی لایه نازک، دی نیتروسالیسیلیک اسید،α-آمیلاز Bacillus Amyloliquefaciens BEH 111, α-Amylase, Thin Layer Chromatography, Dintrosalicyclic Acid 41 48 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-61-25&slc_lang=fa&sid=1 Elham Aryapour الهام آریاپور parvinshariati@yahoo.com 10031947532846001450 10031947532846001450 Yes Department of Microbiology, Islamic Azad University, Falavarjan Branch, Isfahan- Iran گروه میکروبیولوژی ،دانشگاه آزاد اسلامی واحد فلاورجان، اصفهان ،ایران Parvin Shariati پروین شریعتی 10031947532846001451 10031947532846001451 No Department of Industrial and Environmental Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology (NIGEB), Tehran- Iran. گروه زیست فناوری صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری (NIGEB) ، تهران،ایران Fatemeh Tabandeh فاطمه تابنده 10031947532846001452 10031947532846001452 No Department of Industrial and Environmental Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology (NIGEB), Tehran- Iran. گروه زیست فناوری صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری (NIGEB) ، تهران،ایران Bagher Yakhchali باقر یخچالی 10031947532846001453 10031947532846001453 No Department of Industrial and Environmental Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology (NIGEB), Tehran- Iran. گروه زیست فناوری صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری (NIGEB) ، تهران، ایران