fa شناسایی Brucella.spp در نمونه های شیر خام و پنیر به وسیله تکنیک Hemi Nested PCR میکروبیولوژی Microbiology مقاله پژوهشی Research Article <p align="justify"> <strong>سابقه و هدف.</strong> بروسلا یک کوکوباسیل گرم منفی می باشد که میزبانهای آن شامل انسان، گاو، بز و گوسفند می باشد. بروسلا از طریق شیر و فراورده های لبنی انتقال یافته و در انسان سبب ایجاد تب مالت می شود. روشهای سرولوژیک تشخیص بروسلا از حساسیت و دقت کافی برخوردار نبوده و دارای نتایج مثبت و منفی کاذب فراوانی می باشند. هدف از این مطالعه بررسی کارایی تکنیک همی نستد PCR جهت تشخیص بروسلا در نمونه های شیر و پنیر می باشد. </p><p align="justify"><strong>مواد و روشها.</strong> در این مطالعه 15 نمونه شیر خام ، 15 نمونه پنیر پاستوریزه و 15 نمونه پنیر سنتی از سطح استان تهران جمع آوری گردید. DNAی نمونه ها به وسیله کیت DNP استخراج گردید. پس از بهینه نمودن راند اول و دوم تست PCR، حساسیت و اختصاصیت آن مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس تمامی نمونه ها به وسیله تست PCR بهینه شده مورد بررسی قرار گرفتند. </p><p align="justify"><strong>یافته ها.</strong> محصول آمپلیکون تکثیر یافته در محصول اول PCR ،443 جفت باز و در محصول دوم 225 جفت باز بود. حساسیت تست PCR بهینه شده تا 100 پارتیکل تعیین گردید. از 15 نمونه شیر خام،10 نمونه PCR مثبت، از 15 نمونه پنیر پاستوریزه 6 نمونه و از 15 نمونه پنیر سنتی 8 نمونه PCR مثبت شدند.</p><p align="justify"><strong>نتیجه گیری .</strong> با توجه به نتایج بدست آمده ، تست PCR مورد بررسی در این مطالعه از حساسیت و دقت بسیار بالایی نسبت به روشهای متواتر برخوردار بوده، همچنین به نظر می رسد ضرورت استفاده از روشهای مولکولی به عنوان یک روش تاییدی جهت تشخیص بروسلا در کنار روشهای متداول غربالگری اجتناب ناپذیر می باشد. </p> <p> <strong>Aim and Background.</strong> Brucella spp. is a gram negative coco bacillus which has different hosts including human, cow, sheep and goat. Brucella spp. is transferred via milk and dairy products causing a Malta fever in human. Serological methods for Brucella spp. detection do not have sufficient sensitivity and accuracy in addition, they have great false positive and negative results. The aim of this study is determination of the hemi nested PCR technique sensitivity for detection of Brucella spp. in raw milk and cheese.</p><p> <strong>Materials and methods.</strong> In this study 15 raw milk samples, 15 pasteurized cheese samples and 15 traditional cheese samples were collected from Tehran and suburbs. DNA was extracted using DNP kit from samples. After optimization of first and second round of PCR, sensitivity and specificity of reactions were examined. Then all samples were tested using developed PCR.</p><p> <strong>Results.</strong> The PCR product which was obtained from first PCR round had 443 bp length, and the second round fragment had 225bp. The PCR sensitivity up to 100 particles was observed. Among 15 samples of raw milk, 10 cases were PCR positive. In 15 pasteurized cheese samples only 6 cases were PCR positive, and finally from 15 traditional cheese samples 8 were PCR positive. </p><p><strong>Conclusion.</strong> With respect to this result, it could be said that in comparison with conventional detection technique for Brucella spp. diagnosis, PCR has a significant sensitivity and accuracy. Furthermore, it seems that using molecular detection technique as confirmative tests for detection of Brucella spp. is inevitable. </p> بروسلا ، شیر ، پنیر ، Hemi Nested PCR Brucella spp, Milk, Cheese, Hemi Nested PCR 83 90 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-61-29&slc_lang=fa&sid=1 Amir Izadi امیر ایزدی amir_izad@yahoo.com 10031947532846001484 10031947532846001484 Yes Young Researcher Club, Islamic Azad University, East Tehran Branch, Tehran- Iran باشگاه پژوهشگران جوان ، دانشگاه آزاد اسلامی واحد تهران شرق،تهران ،ایران Elham Moslemi الهام مسلمی 10031947532846001485 10031947532846001485 No Department of Biology, Islamic Azad University ,East Tehran Branch, Tehran-Iran. گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد تهران شرق ،تهران ،ایران Ali Hossein yazdi علی حسین یزدی 10031947532846001486 10031947532846001486 No Department of Genetic, Islamic Azad University Science and research Branch, Tehran- Iran. گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم تحقیقات،تهران ،ایران