fa مطالعه خصوصیات بیوشیمی الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا سویه‌ی PTCC1430 میکروبیولوژی Microbiology مقاله پژوهشی Research Article <p><strong>سابقه و هدف:</strong>  متالوپروتئازها کاربردهای فراوانی در صنعت از جمله در سنتز پپتید و آسپارتام دارند . با این وجود استفاده از <br>آن ها با محدودیت هایی از قبیل ناپایداری به سبب اتولیز مواجه است. در تحقیق حاضر خصوصیات بیوشیمیایی یک متالوپروتئاز (الاستاز) حاصل از باکتری <i>سودوموناس آئروجینوزا</i> پس از خالص سازی مورد بررسی قرار گرفت. </p><p><strong>مواد و روش ها:</strong><strong> </strong>با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی پروتئین نوترکیب از <i>E. coli </i>خالص گردید. با رسم منحنی فعالیت آنزیم در دماهای مختلف وابستگی فعالیت به دما بررسی و دمای بهینه تعیین گردید. با استفاده از بافر میکس pH بهینه و با غیر فعال سازی حرارتی برگشت ناپذیر شیب غیرفعال سازی، t_1/2 و پارامترهای ترمودینامیکی غیرفعال سازی تعیین گردید.<strong></strong> </p><p><strong>یافته ها:</strong>دمای بهینه در هر سه غلظت 0، 5 و 10 میلی مولار کلرید کلسیم برابر با 60 درجه سانتیگراد تعیین گردید و pH بهینه 5/8 بدست آمد. شیب غیر فعال سازی حرارتی برگشت ناپذیر در دماهای 55، 60، 65، 70، 75 و 80 درجه سانتی گراد با افزایش دما افزایش یافت. در دماهای مذکور t_1/2 بترتیب 150، 112، 47، 32، 18، 8 و 4 دقیقه محاسبه گردید. مقادیر E_a ، D H ^#، D S ^#و D G ^#بترتیب 7/37 ، 02/37 و 61/23 کیلوکالری بر مول و مقدار k_inactivation برابر با ^1- s 10³ × 49/4 بدست آمد. </p><p><strong>نتیجه گیری:</strong> از نظر وابستگی به دما الاستاز <i>سودوموناس آئروجینوزا</i> یک آنزیم با خصیوصیات مابین مزوفیل ها و ترموفیل ها می باشد. کلسیم در میزان دمای بهینه بی تاثیر است، و این پیشنهاد می کند پایداری آنزیم مذکور غیر وابسته به کلسیم است.</p><p>  </p> <p> <strong>Aim and Background </strong><strong>. </strong>Metalloproteases have numerous industrial applications such as peptide and aspartame synthesis. However, their application is limited by instability as a result of autolysis. . In the present study, following purification, biochemical properties of a metalloprotease (elastase) from <i>Pseudomonas aeruginosa</i> have been investigated. </p><p><strong>Materials and Methods. </strong>Recombinant protein has been purified from <i>E. coli</i> by affinity chromatography. Temperature dependence of enzyme activity and optimum temperature has been measured using a plot of enzyme activity versus different temperatures. Optimum temperature of enzyme activity has been determined within a mix buffer solvent by activity measurements at different pHs, and the inactivation rate, t_1/2and thermodynamic parameters of inactivation have been determined using irreversible thermoinactivation. </p><p><strong>Results. </strong>Optimum temperature was 60°C in the presence of 0, 5 and 10 mM CaCl₂, and optimum pH was 8.5. Inactivation rate was increased with elevation of temperature from 55 to 80°C. Half-life of thermoinactivation ( t_1/2 ) was 150, 112, 47, 32, 18, 8 and 4 min at 55, 60, 65, 70, 75 and 80°C, respectively. E_a, D H ^#, D S ^#and D G ^#was 37.70, 37.02, 23.61 kcal/mol, respectively, and k_inactivationwas 4.49 ´ 10³ s^-1. </p><p><strong>Conclusion </strong><strong>. </strong><i>Pseudomonas aeruginosa </i>elastase can be considered between thermophilic and mesophilic enzymes. Optimum temperature did not alter in different calcium concentrations which imply that elastase stability is Ca-independent. </p> الاستاز، پایداری حرارتی، پایداری سینتیکی، pH. Elastase, Thermal Stability, Kinetic Stability, pH. 73 77 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-61-41&slc_lang=fa&sid=1 Hossein Rahmani حسین رحمانی 10031947532846001814 10031947532846001814 No Department of Biology, Faculty of Science, University of Guilan, Rasht, Iran بیوشیمی، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه گیلانٰ،گیلان،ایران Seyed Mohsen Asghari سید محسن اصغری sm_asghari@guilan.ac.ir 10031947532846001815 10031947532846001815 Yes Department of Biology, Faculty of Science, University of Guilan, Rasht, Iran بیوشیمی گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه گیلانٰ،گیلان،ایران Sanaz Ebrahimi ساناز ابراهیمی 10031947532846001816 10031947532846001816 No Department of Biophysics, Faculty of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran بیوشیمی، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه گیلانٰ،گیلان،ایران Afsaneh Sadr-e-Momtaz افسانه صدر ممتاز 10031947532846001817 10031947532846001817 No Department of Biophysics, Faculty of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran بیوشیمی، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه گیلانٰ،گیلان،ایران Majid Taghdir مجید تقدیر 10031947532846001818 10031947532846001818 No Department of Biophysics, Faculty of Biological Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran بیوفیزیک گروه بیوفیزیک، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرسٰ،تهران،ایران