fa کلونینگ، بیان ژن وتخلیص آنزیم CEL Iاندونوکلئاز از گیاه کرفس ژنتیک Genetics مقاله پژوهشی Research Article <p><strong>اهداف: </strong>آنزیم I CEL یک گلیکوپروتئین گیاهی است که از گیاهان دسته کرفس استخراج می شود و <strong></strong>اولین آنزیم یوکاریوتی است که پیوند ناجور را با یک اختصاصیت بالا در یکی از دو رشته DNA برش می دهد. هدف از این پژوهش کلون کردن ژن، بیان و تخلیص آنزیم CEL I اندونوکلئاز و بررسی عملکرد آن بر روی ژنهای جهش یافته در محیط آزمایشگاهی بوده است. </p><p><strong>مواد و روش ها: </strong>در این تحقیق از گیاه کرفس mRNA استخراج شد و سپس RT-PCR صورت گرفت و محصول به عنوان الگودر تکثیر PCR مورد استفاده قرار گرفت. ژن در پلاسمید بیانی <i>pET32a </i>ساب کلون شد و درون باکتری <i>E.coli </i>سویه <i>BL2I( </i>DE₃) plysS ترانسفورم گردید. پروموتور ژن با IPTG القا شد و با وسترن بلاتینگ مورد بررسی قرار گرفت. پروتئین با ستون کروماتوگرافی تمایلی ( S.Tag / His.Tag ) تخلیص شد. همچنین فعالیت اندونوکلئازی آنزیم روی محصول PCR ژن جهش یافته و نرمال در حال بررسی می باشد. </p><p><strong>یافته ها: </strong>کلونینگ ژن با موفقیت انجام شد، پروتئین نوترکیب تخلیص شد و نتایج اولیه نشان دادند که آنزیم می تواند نواحی هترودوبلکس ژن را شناسایی کند. </p><p><strong>نتیجه گیری: </strong>آنزیم CEL I نوترکیب می تواند نواحی هترودوبلکس راشناسایی نماید. </p> <p><strong>Aims </strong><strong>. </strong>CEL I, is isolated from celery and the first eukaryotic nuclease is known to have cleavage DNA with high specificity at sites of the two DNA strands in a heteroduplex DNA molecule . The aim of this study was cloning, expression and purification CEL I endonuclease and <strong>a </strong>simple method for the detection of <strong>mutation </strong><strong>s</strong>. </p><p><strong>Material & Methods </strong><strong>. </strong>CEL I mRNA was used for RT-PCR. CEL I cDNA was synthesized and cloned into T-vector pTZ57R, then CEL I subcloned into pET32a expression vector. Recombinant plasmid was transformed into BL2I bacterial cells. Expression of recombinant plasmid was analyzed by western blot technique. Protein was purified by affinity chromatography . In first study, Recombinant enzyme was active in mutation detection in Product PCR normal and mutant <i>BRCA1 </i>gene. </p><p><strong>Results. </strong>The recombinant ( pET32a /CEL I) was successfully expressed in BL2I cells. Western blot analysis showed that the successfully expressed CEL I in the cells transfected . The first study showed that recombinant enzyme is kno wn to nick mismatch sites of the two DNA strands in a heteroduplex DNA molecule. </p><p><strong>Conclusion. </strong>The expression of CEL I in BL2I cells was strong. In vitro, purification protein was successful. Recombinant nucleases CEL I known to nick mismatch sites in a heteroduplex DNA molecule. </p> آنزیم CELI اندونوکلئاز، ،وسترن بلاتینگ، پلاسمید pET32a ، پروتئین نوترکیب، کروماتوگرافی تمایلی CELI endonuclease enzymes, western blotting, plasmid pET32a, recombinant proteins, affinity chromatography 79 87 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-61-42&slc_lang=fa&sid=1 Solmaz Kaligh سولماز خلیق فرد skhalighfard96@gmail.com 10031947532846001819 10031947532846001819 Yes Department of Biology, Faculty of Sciences, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه ، واحد علوم و تحقیقات ، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Mojgan Bandehpour مژگان بنده پور 10031947532846001820 10031947532846001820 No Department of Biology, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti, University of Medical Sciences گروه بیوتکنولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی شهید بهشتی Vahid reza Yassaee وحید رضا یاسایی 10031947532846001821 10031947532846001821 No Genomic Research Center, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences مرکز تحقیقات سلولی مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی شهید بهشتی Kazem Parivar کاظم پریور 10031947532846001822 10031947532846001822 No Department of Biology, Faculty of Sciences, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه ، واحد علوم و تحقیقات ، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Bahram Kazemi بهرام کاظمی 10031947532846001823 10031947532846001823 No Cellular & Molecular Research Center, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences مرکز تحقیقات سلولی مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی و خدمات بهداشتی درمانی شهید بهشتی