fa مقایسه روش‌های مختلف (میکروبی، آنزیمی‌ومولکولی) تشخیص آلودگی مایکوپلاسمایی در رده های سلولی انسانی و حیوانی ذخیره شده در بانک سلولی انستیتو پاستور ایران میکروبیولوژی Microbiology مقاله پژوهشی Research Article <p><strong>اهداف و سابقه: </strong>آلودگی مایکوپلاسما در کشت‌ سلول از مشکلات جدی در تولید فرآورده‌های بیولوژیک محسوب می‌شود. هدف ما در این پژوهش انتخاب بهترین روش استاندارد به عنوان روشی سریع با حساسیت و اختصاصیت و دقت بالا برای تشخیص آلودگی مایکوپلاسما در کشت های سلولی بانک سلولی ایران می‌باشد. <strong></strong></p><p><strong>مواد و روش‌ها: </strong>در این پژوهش40 رده‌ی سلولی مشکوک به آلودگی مایکوپلاسما توسط سه روش کشت میکروبی، آنزیمی و مولکولی مورد مطالعه واقع گردیدند. ارزیابی آنزیمی به کمک کیت mycoalert انجام شد و در روش مولکولی از پرایمر یونیورسال طراحی شده بر مبنای سکانس‌های ثابت و مشترک موجود در SrRNA 16 ریبوزومی استفاده گردید. </p><p><strong>یافته‌ها: </strong>درصد آلودگی مایکوپلاسمایی در کشت‌های سلولی با روش‌های مولکولی، آنزیمی و میکروبی به ترتیب با 5/57% و 5/52% و 40% استحصال گردید.نتایج حکایت از تایید حساسیت، ویژگی و صحت(دقت) بالای ارزیابی مولکولی واکنش‌های زنجیره‌ای پلیمراز ( PCR ) در مقایسه با دو روش آنزیمی و کشت میکروبی دارد. </p><p><strong>نتیجه‌گیری: </strong>سنجش PCR بر مبنای سکانس‌های ثابت و مشترک موجود در SrRNA 16 ری بوزومی، تکنیکی ارزشمند ، مفید و قابل اعتماد با حساسیت ، اختصاصیت و دقت بالا جهت شناسایی آلودگی‌های مایکوپلاسمایی در کشت‌های سلولی و سایر فرآورده‌های بیولوژیک می باشد. تکنیک آنزیمی mycoalert با توجه به حساسیت ،ویژگی و سرعت بالای آن در تشخیص آلودگی مایکوپلاسمایی (کمتر از 20 دقیقه) بعد از PCR ، می‌تواند جایگزین روش های‌ کشت میکروبی و رنگ آمیزی DNA فلوئوروکروم گردد. </p> <p><strong>Aims and Background </strong>: Mycoplasma contamination in cell culture is considered as a serious problem in the manufacturing of biological products. Our goal in this research is to find the best standard and a rapid method with high sensitivity, specificity and accuracy for the detection of mycoplasma contamination in cell cultures of National Cell Bank of Iran. </p><p><strong>Materials and methods: </strong>In this study, 40 cell lines suspected of mycoplasma contamination were evaluated by three different methods (microbial cultivation, enzymatic and molecular). Enzymatic evaluation was performed using Mycoalert® kit and in molecular technique, a universal primer designed based on common and fixed 16SrRNA ribosomal sequences was used. </p><p><strong>Results: </strong>Mycoplasma contamination in cell cultures with molecular, enzymatic and microbial cultivation methods were analyzed as 57.5%, 52.5% and 40% respectively. These results confirmed the higher rate of sensitivity, specificity and accuracy for molecular method in comparison with enzymatic and microbial methods. </p><p><strong>Conclusion: </strong>PCR assay based on fixed and common sequences in the 16SrRNA is a useful, valuable and reliable technique with high sensitivity, specificity and accuracy for the detection of mycoplasma contamination in cell cultures and other biological products.  The enzymatic Mycoalert ® method with respect to its sensitivity, specificity and very high speed detection of mycoplasma contamination (less than 20 minutes) after PCR can be used instead of conventional microbial culture and DNA staining fluorochrome methods. </p> کشت سلولی ،آلودگی مایکوپلاسمایی، رده‌های سلولی انسانی- حیوانی Cell Culture, Mycoplasma Contamination, Human-Animal Cell Lines 37 59 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-61-49&slc_lang=fa&sid=1 Vahid Molla Kazemiha وحید ملا کاظمی ها vmkazemi@yahoo.com 10031947532846002079 10031947532846002079 Yes Department of Microbiology, Science Faculty, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Arak , Iran. دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات اراک،اراک-ایران Reza Mahdian رضا مهدیان 10031947532846002080 10031947532846002080 No Molecular Medicine group, Department of Biotechnology, Pasteur Institute of Iran, Tehran,Iran. گروه پزشکی مولکولی،بخش بیوتکنولوژی، انستیتوپاستورایران،تهران-ایران Arash Memarnejadian آرش معمارنژادیان 10031947532846002081 10031947532846002081 No Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran,Iran گروه ویروس شناسی، بخش هپاتیت و ایدز ،انستیتوپاستورایران،تهران-ایران Mohammad Ali Shokrgozar محمد علی شکر گزار 10031947532846002082 10031947532846002082 No Department of National Cell Bank of Iran, Pasteur Institute of Iran, Tehran,Iran بخش بانک سلولی،انستیتو پاستور ایران،تهران-ایران Hamid Reza Mohajerani حمیدرضا مهاجرانی 10031947532846002083 10031947532846002083 No Department of Microbiology, Science Faculty, Islamic Azad University, Arak, Iran گروه میکروبیولوژی دانشگاه آزاد اسلامی واحد اراک، اراک-ایران Amir Amanzadeh امیر امان زاده 10031947532846002084 10031947532846002084 No Department of National Cell Bank of Iran, Pasteur Institute of Iran,Tehran,Iran بخش بانک سلولی،انستیتو پاستور ایران،تهران-ایران Shahram Azari شهرام آذری 10031947532846002085 10031947532846002085 No Department of National Cell Bank of Iran, Pasteur Institute of Iran,Tehran,Iran بخش بانک سلولی،انستیتو پاستورایران،تهران-ایران