fa کلونینگ و بیان ترشحی ژن آنزیم لیپاز باسیلوس پومیلوسF3 بومی ایران در باکتری باسیلوس سوبتیلیس و مقایسه میزان بیان آن نسبت به فرم طبیعی آنزیم سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <p><strong>سابقه و هدف </strong>: لیپازها بیوکاتالیست های ارزشمندی هستند که به علت کاتالیز نمودن واکنش های شیمیایی مانند آبکافت، کافت الکلی، کافت اسیدی و استرفیکاسیون در صنعت دارای کاربردهای فراوانی می باشند. لیپازهای میکروبی از مهمترین انواع این آنزیم ها هستند که به علت پایداری بالا در حلال های آلی، توانایی کاتالیز ملایم واکنش های هیدرولازی، سهولت در تولید و هزینه های نسبتا پایین آن یکی از مهمترین منابع تولید در صنعت محسوب می گردند. باکتری باسیلوس پومیلوس یکی از مهمترین منابع میکروبی این آنزیم می باشد، اما بیان و ترشح پایین این لیپاز یکی از مهمترین مشکلات پیش رو جهت تولید آن توسط این باکتری محسوب می شود. هدف از این تحقیق تولید نوترکیب آنزیم لیپاز سویه بومی باسیلوس پومیلوس بصورت ترشحی به منظور افزایش سطح بیان آن در باکتری باسیلوس سوبتیلیس می باشد. </p><p><strong>مواد و روش ها </strong>: ژن تولید کننده آنزیم لیپاز این سوش با استفاده از مهندسی ژنتیک در پلاسمید pWB980 <strong></strong>همسانه سازی شد و پس از آن به سوش باسیلوس سوبتیلیس WB600 <strong></strong>به عنوان میزبان منتقل گردید.<strong> </strong>در ادامه سطح بیان و ترشح آنزیم به صورت طبیعی و نوترکیب بررسی و مقایسه گردید<strong>. </strong></p><p><strong>یافته ها: </strong>آنزیم لیپاز در باسیلوس سوبتیلیس بصورت ترشحی بیان شد. میزان بیان این آنزیم نسبت به سوش طبیعی بیشتر می باشد. </p><p><strong>نتیجه گیری </strong>: تولیدنوترکیب لیپاز باسیلوس پومیلوس در باکتری باسیلوس سوبتیلیس روش مناسبی برای افزایش میزان بیان این آنزیم می باشد. </p> <p><strong>Aim and Background: </strong>Lipases are the valuable biocatalysts which have many applications in the industry. It is widely used in catalyzing chemical reactions such as water, alcoholic, acidic hydrolysis and also esterification. Bacterial lipases are the most important kinds of enzymes in the industry because they have special advantages such as the high stability in organic solvent, the ability of soft catalyzation of hydrolytic reactions, facility in production process and it’s relatively low cost. <i>Bacillus pumilus</i> is one of the most considerable bacterial sources of this enzyme but the main problem for producing this enzyme is low expression and secretion. The aim of this research is the production of recombinant lipase from native strain in secreting manner for increasing the level of expression in <i>Bacillus subtilis.</i> </p><p><strong>Materials and methods </strong>: Lipase-coding gene of <i>bacillus pumilus</i> was cloned into pWB980 plasmid by genetic engineering. After this step, construction plasmids were transferred to <i>Bacillus subtilis</i> WB600 as a host. Then expression and secretion level between native and recombinant forms was evaluated and compared. </p><p><strong>Results: </strong>Secretory form of lipase enzyme was expressed in <i>Bacillus subtilis</i>. An expression level of this enzyme is higher than normal strain. <strong>Conclusion </strong>: Recombinant lipase production in <i>Bacillus subtilis</i> is a suitable method for increasing the expression of this enzyme </p> لیپاز، کلونینگ، باسیلوس سوبتیلیس، بیان ترشحی Lipase, Cloning, Bacillus subtilis, secretory expression 67 73 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-61-51&slc_lang=fa&sid=1 Akbar Heydari اکبر حیدری 10031947532846002091 10031947532846002091 No Department of Microbiology, Faculty of Biological Sciences, Shahid Beheshti University, Tehran, Iran. گروه میکروب شناسی – دانشکده علوم زیستی – دانشگاه شهید بهشتی - تهران – ایران Mehrdad Moosazadeh Moghaddam مهرداد موسی زاده مقدم 10031947532846002092 10031947532846002092 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی- دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا...(عج)- تهران – ایران. Hossein Aghamollaei حسین آقا ملایی aghamolaei22@gmail.com 10031947532846002093 10031947532846002093 Yes Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی- دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا...(عج)- تهران – ایران Mohammad Bagher Yakhchali محمد باقر یخچالی 10031947532846002094 10031947532846002094 No Department of Industrial and Environmental Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology, Tehran, Iran پژوهشکده بیوتکنولوژی صنعتی و محیطی – پژوهشگاه ملی ژنتیک – تهران - ایران Bijan Bambaee بیژن بمبئی 10031947532846002095 10031947532846002095 No Department of Industrial and Environmental Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology, Tehran, Iran پژوهشکده بیوتکنولوژی صنعتی و محیطی – پژوهشگاه ملی ژنتیک – تهران – ایران Ali Mohammad Latifi علی محمد لطیفی 10031947532846002096 10031947532846002096 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی- دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا...(عج)- تهران – ایران Mohammad Heiat محمد هیئت 10031947532846002097 10031947532846002097 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی- دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا...(عج)- تهران – ایران