fa کلونینگ آنزیم فیتاز پنیوفورا لایسی حاوی برچسب‌ هیستیدین در مخمر سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <p><strong>سابقه و هدف: </strong>فیتیک‌اسید، یکی از ترکیبات معدنی بسیار مهمی است که در درون گیاهان ذخیره‌ می‌شود<strong>. </strong>فیتاز ( E.C. 3.1.3.8 یا E.C. 3.1.3.26 ) به صورت گسترده‌ای به عنوان یک افزودنی جهت افزایش جذب فسفر و سایر عناصر در حیوانات تک‌معده‌ای به غذای آنها اضافه شده و بدین ترتیب سبب کاهش دفع فسفات به داخل محیط می‌گردد. در این تحقیق، کلونینگ و افزودن برچسب شش آمینواسیدی هیستیدین به ژن نوترکیب فیتاز در باکتری اشرشیا‌کلی و سپس مخمر، به منظور خالص‌سازی آنزیم تولید شده در مقادیر بالا در این میزبان، انجام شد. </p><p><strong>مواد و روش‌ها: </strong>توالی پروتئینی آنزیم فیتاز قارچ <i>P. lycii </i>از بانک های اطلاعاتی پروتئین استخراج شده و با توجه به ترجیح کدنی مخمر ، توالی ژن طراحی و سنتز گردید. با طراحی پرایمرهای مناسب توالی حاوی شش هیستیدین به ژن مورد نظر داخل حامل دوگانه­ی pFPMTMF <!--o-application 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Phytase (E.C. 3.1.3.26 or E.C. 3.1.3.8) has been used as a cereal feed additive that can enhance the phosphorus and mineral absorption in monogastric animals food so it can reduce the phosphorus output into the environment. In this research, Cloning of gene encoding phytase containing hexahistidine-tag was conducted in <i>Escherichia coli</i> and then yeast for purification of the produced enzyme after expression in this yeast. </p><p><strong>Material and method: </strong>Sequence of protein encoding <i>Peniophora lycii </i>fungal phytase, was obtained from protein data bank, designed and then synthesized according to the expression codon usage of the yeast. A piece of DNA containing hexahistidine-tag was added into the pFPMTMF <!--o-application progid="Word.Document-->14<rsids><rsidroot wsp:val="00F17B77" ><rsid wsp:val="0000180E" ><rsid wsp:val="00003BC3" ><rsid wsp:val="00007D93" ><rsid wsp:val="00016583" ><rsid wsp:val="000205CC" ><rsid wsp:val="00025CD7" ><rsid wsp:val="000464C8" ><rsid wsp:val="000520E1" ><rsid wsp:val="00054CEF" ><rsid wsp:val="0007163A" ><rsid wsp:val="00077193" ><rsid wsp:val="00084389" ><rsid wsp:val="00084DC8" ><rsid wsp:val="00086F7F" ><rsid wsp:val="000A17F3" ><rsid wsp:val="000A27D2" ><rsid wsp:val="000B11F7" ><rsid wsp:val="000B1910" ><rsid wsp:val="000C3959" ><rsid wsp:val="000C514A" ><rsid wsp:val="000D3613" ><rsid wsp:val="000D5853" ><rsid wsp:val="000E2BD0" ><rsid wsp:val="000E7B0A" ><rsid wsp:val="000F3050" ><rsid wsp:val="001031B8" ><rsid wsp:val="001127B2" ><rsid wsp:val="001161C8" ><rsid wsp:val="0012484B" ><rsid wsp:val="00124CEB" ><rsid wsp:val="0012563B" ><rsid wsp:val="00126E50" ><rsid 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Presence of gene in bacteria and yeast was proved with double digest and PCR methods. </p><p><strong>Conclusion: </strong>Successful cloning of fungal phytase gene containing hexahistidine-tag was conducted in <i>Escherichia coli</i> bacteria and then yeast for high level expression and purification of this enzyme. <strong> </strong></p> فیتیک‌اسید ، فیتاز، برچسب هیستیدین، کلونینگ و مخمر Phytic acid, Phytase, Hexahistidine-tag, Cloning and yeast 75 83 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-61-52&slc_lang=fa&sid=1 Mohammadtaghy Borjian Borujeni محمدتقی برجیان بروجنی mtborjian@gmail.com 10031947532846002098 10031947532846002098 Yes Master of Science in Agricultural Biotechnology. Nanobiotechnology laboratory, Department of biotechnology, faculty of Energy engineering and new technologies, Shahid beheshti University, Tehran, IRAN بیوتکنولوژی کشاورزی، آزمایشگاه نانوبیوتکنولوژی، گروه بیوتکنولوژی، دانشکده‌ی مهندسی انرژی و فناوری‌های نوین، دانشگاه شهید‌بهشتی، تهران، ایران Seyyed Omid Ranaei Siadat سید امید رعنایی سیادت 10031947532846002099 10031947532846002099 No Associate professor. Nanobiotechnology laboratory, Department of biotechnology, faculty of Energy engineering and new technologies, Shahid beheshti University, Tehran, IRAN گروه بیوتکنولوژی، دانشکده‌ی مهندسی انرژی و فناوری‌های نوین، دانشگاه شهید‌بهشتی، تهران، ایران Shirin Yousefian شیرین یوسفیان 10031947532846002100 10031947532846002100 No Master of Science in Agricultural Biotechnology. Nanobiotechnology laboratory, Department of biotechnology, faculty of Energy engineering and new technologies, Shahid beheshti University, Tehran, IRAN بیوتکنولوژی کشاورزی، آزمایشگاه نانوبیوتکنولوژی، گروه بیوتکنولوژی، دانشکده‌ی مهندسی انرژی و فناوری‌های نوین، دانشگاه شهید‌بهشتی، تهران، ایران Farnaz nikzad jamnani فرناز نیکزاد جمنانی 10031947532846002101 10031947532846002101 No Master of Science in Agricultural Biotechnology. Department of biotechnology, faculty of agriculture and natural resources, science and research branch of Islamic azad University, Tehran, IRAN بیوتکنولوژی کشاورزی، گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه آزاداسلامی واحد علوم و تحقیقات تهران، ایران