fa کلون کردن ژن آنزیم L-آسپاراژیناز Escherichia coli ΙΙ در Bacillus subtilis میکروبیولوژی Microbiology مقاله پژوهشی Research Article <b>سابقه و هدف:</b> ال-آسپاراژیناز ΙΙ کاربرد موثری در درمان لوسمی لنفوبلاستیک (ALL) دارد. این آنزیم از منابع باکتریایی جدا شده و به صورت تجاری به عنوان داروی ضدسرطان عرضه می شود. سلول های سرطانی برخلاف سلول های نرمال، نیاز شدیدی به ال-آسپاراژین دارند، در صورت به کارگیری ال-آسپاراژیناز  (E.C. 3.5.1.1) ال-آسپاراژین به ال-آسپارتات و آمونیوم تبدیل می شود که در نهایت به تخریب سلول های سرطانی منجر می شود. هدف از این پژوهش، کلون کردن ژن ال-آسپاراژیناز <span style="font-style: italic">E. coli</span> II در <span style="font-style: italic">B. subtilis</span> جهت تولید انبوه این آنزیم انجام گرفت. <br><b>مواد و روش ها: </b>ژن ال-آسپاراژیناز  ansB) II) با روش PCR از <span style="font-style: italic">E. coli BL21</span> جدا گردید. قطعه تکثیر یافته و شاتل وکتور بیانی pMR12 توسط آنزیم های <span style="font-style: italic">Hind</span>ΙΙΙ، <span style="font-style: italic">Bam</span>HΙ هضم شد. واکنش اتصال بین قطعه PCR و شاتل وکتور بیانی برش خورده با روش استاندارد انجام گرفت. در مرحله بعد، وکتور نوترکیب با روش شوک با CaCl2 سرد به<span style="font-style: italic">E. coli JM101</span> ترانسفورم شد. در نهایت به میزبان <span style="font-style: italic">B. subtilis</span> با روش شیمیایی انتقال یافت. <br><b>یافته ها:</b> در این مطالعه، ژن ansB به وسیله PCR از <span style="font-style: italic">E. coli BL21</span> جدا و توسط تجزیه و تحلیل آنزیمی محصول PCR تایید گردید و در شاتل وکتور بیانی pMR12 کلون شد. سپس وکتور نوترکیب ابتدا در <span style="font-style: italic">E. coli</span> کلون گردید و وجود ژن 1047bp با تجزیه و تحلیل آنزیمی و واکنش PCR تایید شد به دنبال آن داخل <span style="font-style: italic">B. subtilis</span> کلون شد و استخراج پلاسمید انجام گرفت و با باند شاتل وکتور بیانی pMR12 دارای ژن ansB به صورت صحیح، مقایسه و تایید گردید. <br><b>نتیجه گیری:</b> در این تحقیق با استفاده از شاتل وکتور بیانی pMR12 توانستیم ژن ansB را در <span style="font-style: italic">B. subtilis</span> کلون کنیم. این مطالعه، اولین گزارش کلونینگ ژن ansB در <span style="font-style: italic">B. subtilis</span> است. <b>Aim and Background:</b> L-asparaginaseΙΙ (E.C. 3.5.1.1) has effective usage for treatment of acute lymphoblastic leukemia. This enzyme is isolated from bacterial sources and it is commercially available as an anti-cancer drug. This enzyme catalyzes the hydrolysis of L-asparagine to ammonium and aspartate. Unlike Normal cells, the cancer cells strongly require L-Asparagine leading to destruction of these cells. The propose of this project is cloning of L-asparaginaseΙΙ gene from E. coli in B. subtilis to produce the mass of this enzyme. <br><b>Materials and methods:</b> L-asparaginaseΙΙ gene is isolated from E. coli by PCR approach. The amplified fragment and expression shuttle vector pMR12 are digested by HindΙΙΙ and BamHΙ enzymes. The ligation between DNA fragment and the cloning shuttle vector is done by standard method. In the next step recombinant vector is transferred to E. coli JM101 by cold calcium chloride treatment and finally introduced into B. subtilis by a chemical method. <br><b>Results:</b> in this experiment, ansB gene is isolated from E. coli by PCR and cloned into the expression shuttle vector pMR12. Existence of gene with 1047 bp lenght is confirmed by enzymatic analysis and PCR reaction. Then recombinant vector cloned in E. coli at first and then in B. subtilis. Finally the plasmid extracted and compared with the band of expersion shuttle vector containing ansB gene to confirm. <br><b>Conclusions: </b>In this study, we tried to clone the ansB gene in B. subtilis using expression shuttle vector pMR12. This is the first report of ansB gene cloning in B. subtilis. ال-آسپاراژیناز ΙΙ, کلونینگ, pMR12 ,E. coli ,B. subtilis L-Asparaginase, E. coli, B. subtilis, Cloning, pMR12 . 61 66 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-497-1&slc_lang=fa&sid=1 Hamid hoseinian حمید حسینیان hamid.hos83@yahoo.com 094-695363-5 10031947532846003775 Yes 1. Damghan-Islamic Azad University 1. دانشگاه آزاد اسلامی واحد دامغان Behnaz barzaminy بهار برزمینی 10031947532846003776 10031947532846003776 No 1. Damghan-Islamic Azad University دانشگاه آزاد اسلامی واحد دامغان