fa شناسایی و تشخیص ویروس موزاییک معمولی لوبیا و موزاییک نکروتیک معمولی لوبیا با استفاده از روش Immunocapture RT-PCR سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <p><strong>سابقه و هدف</strong>: در بین عوامل ویروسی متعددی که باعث بروز علایم موزاییک و ایجاد خسارت در گیاه لوبیا چیتی (Phaseolus vulgaris L. ) میشوند، دو ویروس موزاییک معمولی لوبیا BCMV و ویروس موزاییک نکروتیک لوبیا BCMNV اهمیت ویژه ای دارند . به منظور ردیابی این دو ویروس و تعیین برخی خصوصیات سرولوژیک و مولکولی آنها، در یک فصل زراعی نمونه هایی با علایم موزاییک ، رگبرگ روشنی ، برگشتگی ، نکروتیک برگ و ساقه لوبیا جمع آوری گردید. </p><p><strong>مواد و روش ها</strong>: به منظور ردیابی این دو ویروسدر ابتدا نمونه ها با روشهای سرولوژیکDAS-ELISA و لکه گذاری بافتی (Tissue-blot) با آنتی سرم های چند همسانه ای اختصاصی مورد سنجش و ردیابی قرار گرفتند. سپس جهت تأیید و بررسی دقیق تر ، نمونه های انتخابی آلوده در الایزا با آزمون IC-RT-PCR مورد ارزیابی قرار گرفتند </p><p><strong>یافته ها</strong>: cDNA بدست آمده در دستگاه ترموسایکلر تکثیر گردید. محصول حاصل در ژل آگاروز الکتروفورز شد..باند حاصل به اندازه تقریبی 373 باز و 683 باز از سکانس منطقه ای از ژن پروتئین پوششی ویروس مورد نظر به ترتیب برای ویروس موزاییک معمولی و ویروس موزاییک نکروتیک معمولی لوبیا مشاهده گردید.. با بکارگیری تکنیک IC-RT-PCR وبر اساس مقایسه سایز باند های ایجاد شده در این روش ،دو ویروس مذکور ازگیاهان لوبیای آلوده مناطق اراک ، نیشابور ، زنجان وکرج شناسایی و تفکیک گردید.</p><p> <strong>نتیجه گیری</strong>:ویروس موزاییک معمولی و موزاییک نکروتیک معمولی لوبیا بطور گسترده ای در اغلب مناطق کشت و کار لوبیا در ایران پراکنده هستند. و در بعضی اوقات نیز به طور مشترک و تواما گیاه لوبیا را آلوده میسازند. نشان داده شده که تکنیک IC-RT-PCR برای شناسایی و تشخیص این دو ویروس از حساسیت بالایی نسبت به روش الایزا بر خوردار است. در این تکنیک بکارگیری همزمان و مخلوطی از آنتی سرم اختصاصی ویروس و پرایمر های مربوطه با عث شناسایی و تفکیک همزمان دو ویروس در صورت آلودگی توام خواهد شد . </p> <p><strong>Aims and scope</strong>: Several viruses so far have been reported to be the cause of mosaic and yield losses in French bean (Phaseolus vulgaris L.) in Iran. Among these, BCMV, and BCMNV are more important. During a growing season, French bean plant samples were selected with various symptoms of mosaic, vein clearing, leaf rolling, leaf and stem necrosis were collected from bean cultivation fields. </p><p><strong>Material and methods</strong>: The samples were tested serologically against the two viruses using DAS-ELISA and Tissue blot technique with the specific polyclonal antisera obtained from commercial sources .To confirm the Elisa results, selected Elisa positive samples tested applying IC- RT-PCR using virus specific polyclonal antibody and a specific set of primers designed from virus cp-genes region. </p><p><strong>Results</strong>: The cDNA obtained were multiplied in termocycler machine. The results of agarose gel electrophoresis of approx. 373bp and 683bp band were obtained for part of the cp genes of BCMV and BCMNV. Using IC-RT-PCT both viruses were identified from samples of Arak, Neishabour, Zanjan and Karaj provinces.</p><p> <strong>Conclusion</strong>: BCMV and BCMNV are widespread in almost all bean growing regions of Iran and often present in mixture. IC-RT-PCR test for diagnosis and identification of these two viruses is proved to be more sensitive than Elisa test. In this technique combination of a specific antisera and a specific set of primers help in distinguishing the two viruses in mixture. Key word: BCMV, BCMNV, DAS-ELISA, Tissue-blot, IC-RT-PCR </p> BCMV ، BCMNV ، DAS-ELISA ، لکه گذاری بافتی، RT-PCRIC- BCMV, BCMNV, DAS-ELISA, Tissue-blot, IC-RT-PCR 21 28 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-61-70&slc_lang=fa&sid=1 nagisa Salari نگیسا سالاری yahoo.com@negisa.salari 10031947532846002567 10031947532846002567 Yes Plant protection group, Varamin agricultural college گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی ورامین maryam Seyed Musavi مریم سید موسوی m_musavi2050@yahoo.com 10031947532846002568 10031947532846002568 No Microbiology Department, College of biological sciences, Alzara University گروه میکروبیولوژی ، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه الزهرا noooh Shahraeen نوح شهر آئین shahraeen@yahoo.com 10031947532846002569 10031947532846002569 No Plant Virus Research Department, Iranian Research Institute for plant protection-Tehran بخش تحقیقات ویروس شناسی گیاهی- مؤسسه تحقیقات گیاهپزشکی کشور shirin Ghobani شیرین قربانی 10031947532846002570 10031947532846002570 No Plant protection group, Varamin agricultural college گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی ورامین mojdeh Maleki مژده ملکی 10031947532846002571 10031947532846002571 No Microbiology Department, College of biological sciences, Alzara University گروه میکروبیولوژی ، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه الزهرا