fa ساخت اینترنال کنترل تشخیص مولکولی ویروس هپاتیت B به روش PCR-Cloning سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <p><strong>سابقه و هدف:</strong> در تشخیص هپاتیت ناشی از ویروس هپاتیت B (HBV )، بکارگیری تکنیک های آزمایشگاهی حساس و اختصاصی همچون PCR ضروری است. روشهای سرولوژیکی موجود، قابلیت تشخیص سریع و دقیق آلودگی را نداشته درحالیکه روشهای نوین مولکولی مانند PCR ابزار کارآمدی برای ارزیابی میزان شیوع HBV می باشد. بروز نتایج متفاوت در آزمایشگاهها بدلیل استاندارد نبودن از معایب این تکنیک مولکولی قوی است. یکی از مهم ترین موانع در استفاده وسیع از تکنیک PCR تشخیصی، نداشتن اینرنال کنترل مناسب در اکثر تستهای PCR می باشد. هدف این مطالعه طراحی و ساخت اینترنال کنترل پلاسمیدی (IAC) جهت شناسایی ممانعت کننده ها در تست PCR ویروس هپاتیت B و کاربردهای بعدی در آزمایشگاه های تشخیصی است. </p><p><strong>موارد و روش ها:</strong> در این مطالعه برای ساخت اینترنال کنترل داخلی، ابتدا پرایمرهای ویژه تست PCR، برمبنای ژن هدف HBsAg ویروس هپاتیت B، بهینه و سپس حساسیت و ویژگی مشخص شد. پرایمرهای مرکب (Composite Primer) برای IAC-HBV نیز طراحی و از طریق PCR تکثیر و سپس کلون گردید. تعداد حداقل IC در هر واکنش PCR از طریق رقیق سازی و همین طور طیف پاسخ PCR همراه با IC مورد بررسی قرار گرفت. </p><p><strong>یافته ها:</strong> اندازه محصول تشخیصی HBV با پرایمرهای اختصاصی آن برابر با bp 262 و محصولIAC-HBV برابر با 660 جفت باز بود، که از نظر اندازه، اختلاف مطلوب را با هم دارند. تعداد حداقل IC در هر واکنش 1000 عدد تعیین شد. حداکثر حساسیت تست PCR همراه با IC برای DNA ویروس هپاتیت B تا شانزده میلیون پارتیکل ویروس مشخص گردید. در تست ویژگی با عوامل مختلف هیچ محصول ناخواسته ای مشاهده نشد. </p><p><strong>نتیجه گیری :</strong> استفاده از یک اینترنال کنترل در تشخیص مولکولی ویروس هپاتیت B به عنوان کنترل داخلی، می تواند خطاها را شناسایی و باعث استاندارد شدن این تکنیک حساس شود. </p> <p><strong>Background and Aim:</strong> Using sensitive and specific laboratory techniques such as PCR is necessary on diagnosis of hepatitis which caused by hepatitis B virus (HBV). Common serological methods didn’t have the capability of quick and accurate detection of infection detection thought molecular methods such as PCR are effective tools for evaluation prevalence of HBV. A different result for the reason of not being standard is one of the disadvantages of this rich molecular technique. One of the most significant preventives in widespread usage of diagnostic PCR is not having proper PCR internal controls. The aim of this study is designing and constructing plasmid internal control (IAC) for identification of PCR inhibitors and afterward usage in diagnostic laboratories. </p><p><strong>Materials and methods</strong>: In this study for constructing the internal control, PCR specific primers for HBsAg gene of hepatitis B virus were optimized then sensitivity and specificity were determined. Also Composite Primers for HBV-IAC were designed and amplified by PCR then cloned. Minimum number of IC in each PCR reaction was examined through dilution and PCR results with IC. </p><p><strong>Result:</strong> By using special primers HBV PCR product was 262bp and IAC-HBV product was 660bp which had desirable different in sizes. Minimum number of IC in each reaction was 1000. Maximum of PCR sensitivity with IC for hepatitis B virus DNA was determined as 16 million Particles. In specificity test with different factors no non specific product was observed. </p><p><strong>Conclusion</strong>: For Molecular detection of HBV using an internal control can recognize the errors and will standardize this sensitive technique. </p> ویروس هپاتیت B، اینترنال کنترل تکثیری، PCR ، طراحی، ساخت Hepatitis B virus, Internal Amplification Control, PCR, Design, Construction 9 16 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-94-1&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Hassan Shahhosseiny1 محمدحسن شاه حسینی shahhosseiny@yahoo.com 10031947532846002881 10031947532846002881 Yes Department of Microbiology, Shahr-e-Qods Branch, Islamic Azad University, Tehran/Iran دانشگاه آزاد اسلامی- واحد شهر قدس- گروه میکروبیولوژی Nastaran Zahedi نسترن زاهدی 10031947532846002882 10031947532846002882 No Department of Biology, Tehran Science and Research unit, Islamic Azad University, Tehran/Iran. دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات- گروه زیست شناسی Elham moslemi الهام مسلمی 10031947532846002883 10031947532846002883 No Department of Biology, East Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran/Iran . دانشگاه آزاد اسلامی واحد تهران شرق - گروه زیست شناسی