fa ساخت کتابخانه ژنی آنتی‌بادی ScFv انسانی بر پایه T Vector علیه توکسین کزاز ایمونولوژی Immonology مقاله پژوهشی Research Article <div align="left"> <div align="right" style="direction: rtl"><b>سابقه و هدف: </b>امروزه آنتی‌بادی‌ها‌ در حوزه‌های تشخیص و درمان جایگاه ویژه‌ای را به خود اختصاص داده‌اند. در این‌ میان، آنتی‌بادی‌های مونوکلونال کاملاً انسانی به دلیل عدم برانگیختن پاسخ ایمنی در بدن و کارایی بالا در درمان بیماری‌ها مورد توجه قرار‌گرفته‌اند. تحقیق پیش‌رو به‌منظور ساخت کتابخانه ژنی آنتی‌بادی نوترکیب انسانی از یک فرد واکسینه با توکسوئید کزاز انجام گرفته است. <br></div><div align="right" style="direction: rtl"><b>مواد و روش‌ها: </b>ابتدا از فرد ایمن با توکسوئید کزاز خون گرفته شد. سپس لنفوسیت‌ها جدا و RNA از آن ها استخراج گردید. همه تنوع ژن‌های ناحیه متغیر زنجیره‌های سبک و سنگین آنتی‌بادی به روش RT-PCR تکثیر و به صورت ScFv به یکدیگر متصل شدند. سپس این قطعات به داخلT vector الحاق و به باکتریE. coli DH5α انتقال یافتند. پس از آن، الایزا صورت گرفت. جهت تأیید کتابخانه ژنی آنتی‌بادی، پلاسمید آن استخراج و توالی‌یابی انجام شد. <br></div><div align="right" style="direction: rtl"><b>یافته ها:</b> کیفیت cDNA با انجام واکنش توسط پرایمرهای ژن HPRT تأیید شد. صحت انجام مراحل PCR و کلونینگ، توسط الکتروفورز ژل ‌آگارز و برش آنزیمی مورد تأیید قرار‌گرفت. باکتری‌های حاوی پلاسمید نوترکیب با رشد روی محیط کشت بر اساس رنگ آبی و سفید، مشخص شدند. از کلون‌ها پلاسمید استخراج و توالی‌یابی انجام شد. نتایج حاصل از تشابه توالی‌ها در پایگاه داده ی igblast نشان داد که این توالی‌ها مربوط به ژن آنتی‌بادی انسانی می‌باشند. هم چنین توسط الایزا تأیید این که آنتی بادی اختصاصی توکسین کزاز می باشد، صورت گرفت. <br></div><div align="right" style="direction: rtl"><b>نتیجه گیری: </b>در این تحقیق کتابخانه آنتی‌بادی انسانی از فرد ایمن با توکسوئید کزاز، ساخته شد. سپس، ژن آنتی بادی موجود در این کتابخانه توسط توالی یابی و هم ترازی در پایگاه NCBIمورد تأیید قرار گرفت و الایزا اختصاصیت این آنتی بادی ها را مشخص نمود. در‌ ادامه جهت یافتن ژن آنتی‌با‌دی‌ اختصاصی توکسین‌کزاز در این کتابخانه، لازم است غربال گری به روش نمایش ‌فاژی انجام‌ شود. <br></div></div> <b>Aims and Background:</b> Nowadays, monoclonal antibodies (mAbs) became powerful therapeutic and diagnostic tools. Due to showing minimum immunogenic reaction and their properties, human mAbs are important. The purpose of this study was to construct an immune antibody library from a vaccinated donor against tetanus toxin.<br><b> Materials and Methods:</b> A whole blood sample was taken from the donor who was vaccinated against tetanus toxoid. PBMC were isolated by using ficol. After RNA extraction, all variation of VH and VL regions by RT-PCR reactions were amplified and linked as a ScFv antibody. The amplicons were inserted in T-vector and transformed to E. coli DH5α strain, followed by an ELISA test. Plasmids were also extracted and sequenced. <br><b>Results:</b> cDNA quality was confirmed by using HPRT primers. To confirm PCR, insertion and transformation, gel electrophoresis and restriction enzymes digestion were applied. Positive clones were selected based on growth on LB agar which is the blue/white selection method. After plasmid extraction and DNA sequencing, the sequences were aligned using igBLAST at NCBI. The result was shown to have admissible similarity among antibody gene library nucleotide sequences and the antibody genes were deposited in this database. ELISA confirmed this data too. <br><b>Conclusion:</b> In this study, the immune human antibody library was constructed and confirmed using DNA sequencing and sequences alignment in NCBI database. ELISA test confirms antibody specifically. The next step is to screen the library to find an antibody specifically for tetanus toxin. کتابخانه ژنی آنتی‌بادی, ScFv, توکسین کزاز, نمایش فاژی Antibody library gene, ScFv, Tetanuss toxin, ELISA 1 7 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-704-1&slc_lang=fa&sid=1 Hamide Rohaninej حمیده روحانی نژاد nasimhayati@yahoo.com 10031947532846004012 10031947532846004012 No Azad University, oloum tahghighat دانشگاه آزاد اسلامی Jamileh Norouzi جمیله نوروزی nowroozij@yahoo.com 10031947532846004013 10031947532846004013 No Azad University, oloum tahghighat دانشگاه آزاد اسلامی Jalil Fallah Mehrabadi جلیل فلاح مهرآبادی rohaninejhad@gmail.com 10031947532846004014 10031947532846004014 No Malek-Ashtar University of Technology دانشگاه صنعتی مالک اشتر Mehdi Mahdavi مهدی مهدوی jalil.fallah@gmail.com 10031947532846004015 10031947532846004015 Yes Pasteur Institute of Iran انستیتو پاستور ایران mahdavivac@gmail.com 10031947532846004016 10031947532846004016 No