fa بیان و خالص‌سازی ژن نوترکیب Cold sensitive Taq DNA polymerase در E.coli ژنتیک Genetics مقاله پژوهشی Research Article <b> سابقه و هدف:</b> آنزیم DNA پلیمراز مقاوم به حرارت بعلت کاربرد آن در PCR و تحقیقات بیولوژی مولکولی توجه زیادی را به خود معطوف ساخته ‌است و در نتیجه اهمیت مطالعه روی DNA پلیمرازهای مقاوم به حرارت مختلف را دو چندان نموده‌ است. هدف از این مطالعه سنجش عملکرد و میزان تولید آنزیم DNA پلیمراز حساس به سرما و مقاوم به حرارت تولید شده در میزبان باکتریایی و خالص‌سازی سریع و ارزان آن می‌باشد. <div style="direction: rtl"><b>مواد و روش‌ها:</b> بعد از سنتز ژن طراحی شده به صورت مصنوعی، کلونینگ آن به داخل وکتور pET28a انجام شد. سپس پلاسمید حاوی ژن تولیدکننده آنزیم Taq DNA polymerase به سویه E.coli BL21 انتقال یافت. در این مطالعه از IPTG به عنوان القاءگر برای بیان ژن موردنظر استفاده شد. خالص‌سازی اولیه آنزیم توسط امواج اولتراسوند و در ادامه به وسیله شوک حرارتی در 72 درجه سانتی‌گراد و رسوب‌دهی سایر پروتئین‌های نامحلول به وسیله سانتریفوژ انجام گردید. فعالیت و عملکرد Taq DNA polymerase تولید شده در مقایسه با آنزیم تجاری مورد بررسی قرار گرفت. </div><div style="direction: rtl"><b>یافته‌ها: </b>Taq DNA polymerase مقاوم به حرارت و حساس به سرمای نوترکیب بیان شده در E.coli، برتری قابل توجه و عملکرد بهتری نسبت به آنزیم تجاری از نظر فعالیت و مقاومت در برابر حرارت نشان داده است. </div><div style="direction: rtl"> ن<b>تیجه‌گیری:</b> با توجه به اهمیت و سطح کاربرد آنزیم Taq DNA polymerase مقاوم به حرارت در مطالعات زیست‌شناسی مولکولی، روش مورد استفاده در تولید این آنزیم، روشی کاربردی و مقرون به صرفه می‌باشد. به علاوه، سهولت روش به کار گرفته شده و نیز صحت و دقت عمل آنزیم تولید شده، دلیل مناسب و قابل قبولی برای تولید آزمایشگاهی و محلی آنزیم cold sensitive Taq DNA polymerase با خلوص بالا می‌باشد. </div> <b> Aim and Background:</b> Thermostable DNA polymerase enzyme has been taken much into consideration due to its application in PCR and molecular biology researches and it has doubled the importance of the study on the various thermostable DNA polymerase. The purpose of this study was to assay the function and efficient production of the cold sensitive thermostable DNA polymerase and its quick and cheap purification. <div><b>Material and Methods:</b> After synthesis of the designed gene artificially, it was cloned into the pET28 vector and then was transferred into E.coli. IPTG was used as an inducer in the study of gene expression. Initial purification of the enzyme was performed by heat treatment at 72 °C and precipitation of other insoluble proteins by centrifuge. The DNA synthesis activity of crude extract was compared with commercial enzyme. </div><div><b>Result:</b> Recombinant cold sensitive and thermostable Taq DNA polymerase expressed in E.coli showed a significant advantage and more desirable functionality such as activity and thermostable compared to commercial enzyme.  </div><div><b>Conclusion:</b> With regard to importance and application level of thermostable DNA polymerase in molecular biology, the production method used in this study is practical and cost effective. Additionally, the simplicity of producing method of this enzyme and its accuracy is a good reason for artificial and local production of highly pure cold sensitive Taq DNA polymerase. </div> Taq DNA polymerase, E.coli, مقاوم به حرارت, حساس به سرما. Taq DNA polymerase, E.coli, thermostable, cold sensitive. 21 28 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-210-2&slc_lang=fa&sid=1 Samaneh Golayj سمانه گلیج goliyjsama@yahoo.com 10031947532846003347 10031947532846003347 Yes Department of biology, Islamic Azad University of Tonekabon branch, Tonekabon, Iran. گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد تنکابن Ali Nazemi علی ناظمی 10031947532846003348 10031947532846003348 No Department of biology, Islamic Azad University of Tonekabon branch, Tonekabon, Iran. گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد تنکابن Mostafa Jafarpour مصطفی جعفرپور 10031947532846003349 10031947532846003349 No Department of biology, Islamic Azad University of Tonekabon branch, Tonekabon, Iran. گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد تنکابن