fa کلونینگ و بیان ژن drRRA باکتری داینوکوکوس رادیودورانس در اشریشیا کلی سویه Origami سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> <b>سابقه و هدف: </b>داینوکوکوس رادیودورانس یکی از باکتری‌های مقاوم به پرتو است و می‌تواند در محیط‌های رادیو اکتیو که سایر موجودات قادر به رشد در آن نیستند، به حیات خود ادامه دهد. مطالعات نشان می‌دهد که چندین پروتئین آنتی اکسیدان و ترمیم کننده DNA در مقاومت بخشی آن نسبت به پرتو نقش دارند. پروتئین DrRRA یکی از پروتئین‌های تنظیمی مهم داینوکوکوس رادیودورانس در مقاومت بخشی به پرتو است. هدف از این مطالعه کلونینگ و بیان ژن drRRA در اشریشیا کلی بوده است. <br><b>مواد و روش‌ها: </b>ژن drRRA داینوکوکوس رادیودورانس بصورت سنتتیک در وکتور pGEM-B1 ساخته شد و به دنبال آن در وکتور بیانی pET21a ساب کلون شد. برای تایید ساب کلونینگ، هضم آنزیمی و توالی‌یابی انجام شد. برای تایید بیان ژن drRRA در اشریشیا کلی سویه Origami، ژل الکتروفورز پلی اکریل آمید و وسترن بلاتینگ انجام شد. <br><b>یافته‌ها:</b> پلاسمید pET21a حاوی ژن drRRA به همراه برچسب هیستیدینی در قسمت C-ترمینال بطور موفقیت آمیز ساخته شد. همچنین، پروتئین نوترکیب DrRRA بصورت داخل سلولی در اشریشیا کلی ترانسفورم شده تولید شد. <br><b>نتیجه‌گیری: </b>نتایج این مطالعه نشان داد که ساب کلونینگ و بیان ژن drRRA در میزبان اشریشیا کلی امکان‌پذیر می‌باشد، همچنین، میزان بیان پروتئین هدف مناسب بوده و می‌توان مقاومت بخشی پروتئین DrRRA را به پرتو در سیستم‌های پروکاریوتی و یوکاریوتی نیز بررسی کرد. </div> <b>Aim and Background:</b> Deinococcus radiodurans is one of the most radio resistant microorganisms able to survive in an extreme environment. Available data show that multiple DNA repair and antioxidant proteins are involved in radio resistance. DrRRA is a novel response regulator essential for the radio resistant of Deinococcus radiodurans. The aim of this study was cloning and expression of drRRA gene in E. coli system. <br><b>Material and methods:</b> The drRRA gene of Deinococcus radiodurans was synthesized in pGEM-B1 vector and the synthetic gene was subcloned to pET21a expression vector. Subcloning of the gene was verified by double digestion and sequencing. The cloned gene was expressed in E. coli (Origami strain). Expression of recombinant DrRRA (rDrRRA) was confirmed by polyacrylamide gel electrophoresis and Western blotting. <br><b>Results:</b> The chimeric pET21a plasmid containing the C-terminal fusion of His-tag with DrRRA was successfully constructed. Recombinant DrRRA was intracellularly produced by transformed E. coli. <br><b>Conclusion:</b> The results of this study indicated that subcloning and expression of drRRA gene in E. coli is feasible. In addition, the expression level of protein was suitable and it should be analyzed in prokaryotic and eukaryotic systems. مقاومت به پرتو, ژن drRRA, داینوکوکوس رادیودورانس Radiation resistant, drRRA gene, Deinococcus radiodurans 94 89 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-90-1&slc_lang=fa&sid=1 Ramin Fallah zadeh رامین فلاح زاده 10031947532846004250 10031947532846004250 No 1. Department of Bioscience and Biotechnology, Malek Ashtar University of Technology, Tehran, I.R. Iran پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران Jalil Fallah mehrabadi جلیل فلاح مهرآبادی Raminfallah2009@yahoo.com 10031947532846004251 10031947532846004251 Yes 1. Department of Bioscience and Biotechnology, Malek Ashtar University of Technology, Tehran, I.R. Iran پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران Amir mirzaei امیر میرزایی 10031947532846004252 10031947532846004252 No 2. Department of Basic Sciences, Science and Research Branch Islamic Azad University, Tehran, I.R. Iran. دانشگاه آزاد واحد علوم و تحقیقات، گروه زیست شناسی، تهران، ایران Mohammad D Ghafari محمد داود غفاری 10031947532846004253 10031947532846004253 No 3. Young Researchers and Elites Club , North Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran. دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران شمال، باشگاه پژوهشگران جوان و نخبگان، تهران، ایران