fa جداسازی و شناسایی مایکوپلاسما آگالاکتیه(Mycoplasma agalactiae) با استفاده از دو روش کشت و واکنش زنجیره ای پلیمراز(PCR) از شیر گوسفندان منطقه ماسال(استان گیلان) سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <div align="right" style="direction: rtl"> <b>سابقه و هدف:</b> بیماری آگالاکسی واگیردار ((Contagious agalactiae، یک بیماری عفونی دامی در گوسفند و بز محسوب می شود که منجر به عفونت پستان، بیماری مفاصل زانو، کدورت قرنیه چشم و سقط جنین در دام می گردد. مایکوپلاسما آگالاکتیه مهمترین عامل این بیماری در گوسفند و بز می باشد. هدف از این تحقیق جداسازی و شناسایی مایکوپلاسما آگالاکتیه به کمک روش های تشخیصی کشت و PCR از شیر گوسفندان مشکوک به بیماری، در منطقه ماسال از توابع استان گیلان بود. <br><b>مواد و روش ها: </b>در این تحقیق از 5 گله گوسفندی که علائم ظاهری بیماری را داشتند، 25 نمونه از ترشحات پستان اخذ شد که پس از کشت در محیط PPLO broth ، DNA با استفاده از کیت Roche استخراج و مورد آزمون PCR قرار گرفتند. آزمون PCR بر روی نمونه های استخراجی با استفاده از پرایمرهای اختصاصی با محصولاتی به طول bp270 در ژن 16S rRNA برای جنس مایکوپلاسما و 375bp در ژن لیپوپروتئین برای گونه مایکوپلاسما آگالاکتیه انجام شد. <br><b>یافته ها: </b>از مجموع 25 نمونه که ابتدا درمحیط Broth PPLO (جهت غنی سازی و رشد) و سپس در محیط Agar PPLO جهت رشد و تشکیل پرگنه کشت داده شدند، تعداد 9 نمونه(36درصد) با تشکیل پرگنه، مثبت تشخیص داده شدند. در آزمون PCR جنس مایکوپلاسما، 17 نمونه(68درصد) مثبت با باند مشخص bp270 و تعداد 5 نمونه(4/29درصد) با باند مشخصbp375 در آزمون PCR گونه مایکوپلاسما آگالاکتیه، مثبت گزارش شدند. از مجموع 25 نمونه دریافتی تعداد 8 نمونه در دو روش کشت و PCR مثبت، تعداد 7 نمونه در هر دو روش منفی، تعداد 1 نمونه کشت مثبت و PCR منفی و تعداد 9 نمونه PCR مثبت و کشت منفی شدند. <br><b>نتیجه گیری: </b>نتایج حاصله نشان داد که PCRبعنوان روش جایگزین مطمئنی برای کشت، در جداسازی و شناسایی مایکوپلاسما اگالاکتیه قابل استفاده می باشد. مایکوپلاسما آگالاکتیه برای نخستین بار از موارد مشکوک به بیماری از شیر گوسفندان منطقه ماسال گیلان جداسازی شد که بعنوان مهمترین عامل آگالاکسی در این منطقه شناخته نشد. </div> <b>Aim and Background: </b>Contagious agalactiae (C.A) is a serious disease syndrome of sheep and goat characterized by mastitis and subsequent failure of milk production, arthritis, abortion and kerato-conjunctivitis. Mycoplasma agalactiae (M. agalactiae) is the main cause of the disease in sheep and goat. The aim of this study was isolation and identification of M. agalactiae with culture and polymerase chain reaction (PCR) assay from milk of sheep in Masal, Iran <br><b>Material and Methods:</b> A total of 25 samples were collected from milk secretion of sheep. All samples were cultured in PPLO broth supplemented for M. agalactiae isolation. The bacteria DNAs were extracted by High Pure PCR Template Preparation kit and the PCR assay was applied for the detection of Mycoplasma genus in 270bp fragment in 16S rRNA gene and M. agalactiae in 375bp fragment in lipoprotein gene from culture as well as clinical samples. <br><b>Results:</b> Of the 25 samples, 9 (36%) yielded one of the potentially pathogenic Mycoplasmas evaluated for using PPLO agar culture diagnostic method, and 17 (68%) yielded one of the potentially pathogenic Mycoplasmas evaluated for using Mycoplasma genus PCR as diagnostic method, and 5 (29/4%) of the samples yielded M. agalactiae by using M. agalactiae PCR as diagnostic method. Of the 25 samples, 8 samples were culture positive and PCR positive, 7 samples were culture negative and PCR negative whereas 9 samples were culture negative and PCR positive and only one sample was culture positive and PCR negative. <br><b>Conclusion:</b> The result showed that PCR can be used as an alternative method instead of culturing to identify M. agalactiae. M. agalactiae was detected for the first time from milk of sheep in Masal, Iran and it was not the main factor of C.A there. مایکوپلاسما آگالاکتیه, آگالاکسی, کشت, PCR, گوسفند Mycoplasma agalactiae, Contagious Agalactiae, Culture, PCR, Sheep 49 54 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-658-2&slc_lang=fa&sid=1 Mahdi Mohammadpour مهدی محمدپور Mahdi_mohamadpour@yahoo.com 10031947532846004197 10031947532846004197 Yes تهران، فلاح، خیابان سجاد جنوبی، کوچه خوارزمی، پلاک 113 سید علی پوربخش 10031947532846004198 10031947532846004198 No آزمایشگاه مرجع مایکوپلاسما، موسسه تحقیقات واکسن وسرمسازی رازی، کرج، ایران علیرضا آبتین 10031947532846004199 10031947532846004199 No آزمایشگاه مرجع مایکوپلاسما، موسسه تحقیقات واکسن وسرمسازی رازی، کرج، ایران حسین نادری 10031947532846004200 10031947532846004200 No رشت، سلکی سر، دانشگاه علوم و تحقیقات