fa جداسازی و کلونینگ ژن انسانی MAGEA4 در پلاسمید بیانی pRUF سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <div align="right" style="direction: rtl"><b>سابقه و هدف: </b>کنسر تستیس آنتی ژن ها دست های از آنتی ژن ها می باشند که به طور ویژه بیان آن ها در سلول های زایا و انواع مختلفی از سرطان ها دیده شده است. یکی از اعضای این خانوادهMAGEA4 می باشد که این آنتی ژن با انواع تومورها در ارتباط است. از آنجا که عملکرد این ژن هنوز به درستی مشخص نشده است، هدف از این مطالعه تکثیر و کلونینگ این ژن در وکتور بیانی به منظور تولید پروتئین نوترکیب بیان کننده MAGEA4 است. <br></div><div align="right" style="direction: rtl"><b>مواد و روش ها: </b>از طریقPCR و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی حاوی برش آنزیم محدود کننده ژن MAGEA4 تکثیر شد. محصول PCR خاص شده بین سایت های BamH1 وXho1 وکتور pTZ57/R قرار گرفت و در سویه Top10 اشرشیاکلی ترانسفورم گردید و توسط IPTG وX-Gal غربالگری شد. صحیح قرا گرفتن قطعه MAGEA4 توسط برش آنزیمی و تعیین توالی بررسی گردید. سپس ساب کلونینگ این ژن در وکتور بیانی pRUF با همان جایگاه های برش آنزیمی صورت پذیرفت. <br><b>یافته ها: </b>تایید نهایی از طریق PCRکلنی و برش آنزیمی، تعیین توالی صورت گرفت. بنابراین ژنMAGEA4 در جایگاه برشی آنزیمی پلاسمید pRUF کلون شد. <br><b>نتیجه گیری: </b>مطالعه حاضر گام مهمی جهت تولید پروتئین نوترکیب و استفاده از آن جهت پی بردن به عملکرد این ژن و اهداف درمانی به منظور درمان سرطان می باشد. </div> <b>Aim and background:</b> Cancer/testis (CT) antigens are a category of tumor antigens that are typically expressed only in the human germ line, and in several types of tumor. MAGEA4 is one member cancer testis antigen family that has relation with other tumors. Since the biological function of MAGEA4 is unclear, the aim of the present study was amplification and cloning of the gene in the expression vector to produce recombinant protein that expresses MAGEA4. <br><b>Material and method:</b> Using PCR specific primers including restriction site, MAGEA4 was amplified. The purified PCR products were ligated between the BamH1 and Xho1 sites of pTZ57/R cloning vector and transformed into Escherichia coli Top10 strain and screened by IPTG and X-Gal. The correct orientation of MAGEA4 fragment was identified by restriction enzyme analysis and sequencing of constructed plasmid. Then sub cloning was carried out within pRUF expression vector with the same restriction site. <br><b>Result:</b> The final confirmation was performed using colony PCR, double digesting and sequence analysis. Therefore the MAGEA4 gene was cloned into the restriction site of pRUF. <br> <b>Conclusion:</b> This study is an important step for producing recombinant proteins and is used to find the function of this gene for therapeutic targets. کنسر تستیس آنتی ژن, MAGEA4 , کلونینگ, وکتوربیانی pRUF Cancer Testis Antigen, Cloning, MAGEA4, Expression vector pRUF 109 114 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-607-2&slc_lang=fa&sid=1 Zahra hejazi زهرا حجازی 10031947532846004585 10031947532846004585 No Department of Biology, Damghan Branch, Islamic azad university,Damghan,Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحددامغان،دامغان،ایران Mohammad Reza Abbaszadegan محمد رضا عباس زادگان 10031947532846004586 10031947532846004586 No Division of Human Genetics, Immunology Research Center,Avicenna Research Institute, Mashhad University of Medical Sciences آزمایشگاه ژنتیک انسانی، مرکز تحقیقات ایمونولوژی ، پژوهشکده بوعلی ، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، ایران Mehran Gholamin مهران غلامین 10031947532846004587 10031947532846004587 No Division of Human Genetics, Immunology Research Center,Avicenna Research Institute, Mashhad University of Medical Sciences آزمایشگاه ژنتیک انسانی، مرکز تحقیقات ایمونولوژی ، پژوهشکده بوعلی ، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، ایران Mohammad Mahdi Forghanifard محمد مهدی فرقانی فرد forghanifard@gmail.com 10031947532846004588 10031947532846004588 Yes Department of Biology, Damghan Branch, Islamic azad university,Damghan,Iran گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی واحددامغان،دامغان،ایران