New Cellularand Molecular Biotechnology Journal

fa کلون کردن ژن جهش یافته آنتی ژن ایمنی بخش باسیلوس آنتراسیس(PA) در باسیلوس سوبتیلیس Cloning the mutated immune antigen of Bacillus Anthracis in Bacillus subtilis ژنتیک Genetics مقاله پژوهشی Research Article سابقه و هدف: آنتی  ژن ایمنی بخش باسیلوس آنتراسیس پروتئینی با خاصیت اتصال به گیرنده های سطح تمام سلول های بدن انسان می باشد. در سطح سلول های سرطانی گیرنده اختصاصی فعال کننده یوروکینازی پلاسمینوژن (uPA) ایجاد می شود که در سطح سایر سلول های نرمال بدن مشاهده نمی شوند. هدف از انجام این تحقیق تغییر جایگاه اتصال موجود بر روی PA با جهش زایی مستقیم می باشد به نحوی که این پروتئین فقط بتواند به سلول های سرطانی متصل گردد. مواد و روش ها: در طی این تحقیق پلاسمید pMNA1 حاوی ژن PA به روش لیز قلیایی ازمیزبان خود جدا سازی شد. در ادامه با استفاده از پرایمر های فسفریله شده و استفاده از روش  PCR هم پوشان جهش هدفدار بر روی ژن PA صورت پذیرفت. در ادامه قطعه حاصله بطور مستقیم بر روی ناقل PTZ57R کلون و به E.coli سویه DH5α انتقال یافت. با استفاده از آنزیم های برش دهنده KpnI و SalI ژن PA جهش یافته جدا و بر روی ناقل pWB980 انتقال داده شد. در آخر با استفاده از روش الکتروپوریشن به B.subtilis سویه WB600 انتقال یافت. یافته ها: طی این تحقیق در توالی ژن PA با روش SOE PCR جهش ایجاد کرده که در پی آن کد ژنتیکی اسید آمینه 194 تغییر کرد. جهش ایجاد شده با تعیین ترادف بازی تأیید گردید. نتیجه گیری: سرطان مشهور به بیماری غیر قابل درمان و مرگ آور است. یکی از روش های درمان سرطان استفاده از توکسین های باکتریایی است البته در صورتیکه فقط به سلول های سرطانی آسیب برساند. لذا با استفاده از پروتئین تغییر یافته PA که فقط به سلول های سرطانی متصل می گردد می توان امیدی تازه در درمان سرطان ایجاد کرد. Aim And Background: The immune antigen of Bacillus anthracis is a protein that can attach to the surface receptor of all human cells. At the surface of cancer cells there is a receptor that activates the uPA (Urokinase plasminogen) that do not exist in normal human cells. This research was conducted to change the site of attachment of PA gene with making direct mutation so that it can attach only to the cancer cells. Material and Methods: In this study, pMNA1 plasmid containing PA gene was extracted from its host by basic lyse. Subsequently, phosphorylized primers and Overlap Extention PCR were used to make mutation on PA gene. The mutated segment was directly cloned in PTZ57R carrier and transferred to DH5α strain of E. coli. By catalyst enzymes KpnI and SalI the mutated PA gene was extracted and transferred to pWB980and by electroporation method it was transferred to WB600 strain. Results: In this study mutation was occurred in sequences of PA gene by SOE PCR method resulting in a change in the genetic code of amino acid 194. The occurrence of mutation was confirmed by determining of base sequences. Conclusion: Cancer is a serious disease that in many cases leads to death. One of the treatment methods of cancer is bacterial toxins if only cancer cells receive them. Therefore, using changed PA can be a hope in cancer treatment as it attaches only to cancer cells. فعال کننده یوروکینازی پلاسمینوژن, SOE PCR, آنتی ‌ژن ایمنی بخش باسیلوس آنتراسیس . Urokinase plasminogen activator, SOE PCR, immune antigen of Bacillus anthracis, Bacillus. 93 98 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-746-2&slc_lang=fa&sid=1 mohammad Abootaleb محمد ابوطالب mohammad_abootaleb@yahoo.com 10031947532846005288 10031947532846005288 Yes Department of Biology, Islamic Azad University, Damghan Branch دانشگاه آزاد اسلامی، واحد دامغان، دانشکده علوم زیستی Hatef Ajoudanifar هاتف آجودانی‌فر 10031947532846005289 10031947532846005289 No Department of Biology, Islamic Azad University, Damghan Branch دانشگاه آزاد اسلامی، واحد دامغان، دانشکده علوم زیستی