fa بهینه سازی فرایند فیبریل زایی از آلبومین سرم گاوی با روش جذب سنجی کنگورد به‌منظور استفاده از آن‌ها به‌عنوان نانو مواد زیستی بیوشیمی Biochemistry مقاله پژوهشی Research Article <p dir="RTL"><strong>سابقه و هدف: </strong>رشته های آمیلوئیدی نانو ساختارهایی هستند که در نتیجه اتصال پپتیدها و پروتئین&shy;ها به یکدیگر به وجود می آیند. در سال&shy;های اخیر رشته های آمیلوئیدی به عنوان نانو مواد جدید مورد توجه قرار گرفته اند. از این منظر، افزایش میزان آمیلوئیدی شدن پروتئین&shy;ها می تواند مطلوب باشد. در این مطالعه فرایند آمیلوئیدی شدن آلبومین سرم گاوی به عنوان یک پروتئین مدل، بهینه سازی شده است.</p> <p dir="RTL"><strong>مواد و روش&shy;ها</strong>: پروتئین آلبومین سرم گاوی در بافر میکس سیترات-فسفات با <span dir="LTR">pH</span> های مختلف 1 و 2 و 3 و 7/4 و 4/7 قرار گرفته و هر کدام در حمام آب با دماهای مختلف (از 40-80 درجه سانتیگراد) قرار گرفته و به کمک مگنت&shy;های کوچک (برنجی) با سرعت 100 دور در دقیقه و برای زمان&shy;های مختلف 0، 24، 48 و 72 ساعت بهم زده شدند تا رشته های پروتئنی در هر یک بوجود آید. سپس میزان رشته های آمیلوئیدی حاصله به روش جذب سنجی مرئی و با استفاده از رنگ کنگورد مورد بررسی قرار گرفت.</p> <p dir="RTL"><strong>یافته ها: </strong>در این تحقیق اثر چهار متغیر دما، <span dir="LTR">pH</span>، زمان و غلظت پروتئین بر فرایند فیبریل زایی بررسی شده و نتایج حاصله با روش طیف سنجی کنگورد به&shy;صورت تغییرات طول موج ماکزیمم (<span dir="LTR">&lambda;_max</span>) و جذب در طول موج ماکزیمم (<span dir="LTR">A&lambda;_max</span>) و نیز میکروسکوپ الکترونی گذاره مورد تائید قرار گرفت. مشخص شد که بهترین شرایط تشکیل رشته های آمیلوئیدی در غلظت 5 میلی گرم بر میلی لیتر از پروتئین <span dir="LTR">BSA</span> و در <span dir="LTR">pH</span> بافر برابر 3 و پس از 72 ساعت انکوباسیون در دمای 70 درجه سانتیگراد می باشد.</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه گیری:</strong> از روش ساده جذب سنجی کنگورد می توان به&shy;عنوان آزمایش اولیه برای تائید حضور نانو رشته های پروتئینی استفاده نمود و در این راستا، میزان جذب در طول موج ماکزیمم به&shy;عنوان یک شاخص موثق معرفی می شود.</p> <p dir="ltr"><strong>Aim and Background: </strong>Amyloids are fibrilar protein structures produced from aggregation of proteins and peptide together. In recent years amyloid fibrils are being noticed as new experimental nanomaterials and from this view the induction of proteins to amyloids could be beneficial. In this study, the fibrillation of bovine serum albumin (BSA) as a model protein is optimized.</p> <p dir="ltr"><strong>Materials and Methods:</strong>Different pHs of 1, 2, 3, 4.7 and 7.4 of Bovine Serum Albumin were prepared in Mixed Citrate&ndash;Phosphate buffer and agitated for 0, 24, 48 and 72 hour in 100 RPM in various temperatures (40&ndash;80 &ordm;C) for preparing protein fibrils. Then the amount of amyloid fibrils was detected by spectrophotometric congored binding assay.</p> <p dir="ltr"><strong>Results:</strong>In this research, effect of four variables include temperature, pH, time of incubation and protein concentration was investigated on fibrillogenesis and results were confirmed by congored spectrophotometric method as &lambda;_maxand absorbance in &lambda;_max(A&lambda;_max) accompanying with transmission electron microscopy. The optimum condition for fibrillogenesis was specified in 5 mg.ml^-1 of protein and buffer pH of 3 after 72 hour incubation in 70&ordm;C.</p> <p dir="ltr"><strong>Conclusion:</strong>Simple congored spectrophotometric method could be used as primary test for evaluating protein nanobiofibrils and absorbance in &lambda;_maxis introduced as a valid indicator in this way.</p> آلبومین سرم گاوی, آمیلوئید, اسپکتروفوتومتری, کنگورد bovine serum albumin, amyloid, spectrophotometry, congored 65 77 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-792-3&slc_lang=fa&sid=1 Amir Arasteh امیر آراسته arasteh@iaurasht.ac.ir 10031947532846006067 10031947532846006067 Yes Department of biology, Rasht Branch, Islamic Azad University, Rasht, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد رشت، رشت، ایران Ali Salehzadeh علی صالح زاده 10031947532846006068 10031947532846006068 No Department of biology, Rasht Branch, Islamic Azad University, Rasht, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد رشت، رشت، ایران Mehran Habibi Rezaei مهران حبیبی رضایی 10031947532846006069 10031947532846006069 No Protein Technology Research Lab (PBRL), School of Biology, College of Science, University of Tehran, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه تهران، تهران Ali Akbar Moosavi Movahedi علی اکبر موسوی موحدی 10031947532846006070 10031947532846006070 No Institute of Biochemistry and Biophysics, University of Tehran, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوشیمی و بیوفیزیک، دانشگاه تهران، تهران