دوره 11، شماره 42 - ( 1-1400 )
جلد 11 شماره 42 صفحات 94-83 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Saroughi S, Zare M, Kazemi R, Motamedi M, Amani J. PCR and cloning of the lcs chimeric gene in pcDNA3.1 vector and its expression in the cell line. NCMBJ 2021; 11 (42) :83-94
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-1383-fa.html
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-1383-fa.html
ساروقی سپیده، زارع مریم، کاظمی روح الله، معتمدی جواد، امانی جعفر. تکثیر و همسانه سازی ژن سه قسمتی lsc در وکتور pcDNA3.1 و بررسی بیان آن در لاین سلولی. مجله تازه هاي بيوتكنولوژي سلولي و مولكولي. 1400; 11 (42) :83-94
گروه ژنتیک، دانشگاه پیام نور واحد ری، تهران، ایران
چکیده: (2036 مشاهده)
سابقه و هدف: اسهال دومین عامل رایج مرگ و میر کودکان زیر 5 سال است. مهمترین سویههای بیماریزایی اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک با تولید سم Lt و St موجب بیماری اسهال مسافران و اشریشیاکلی انتروهموراژیک با ترشح سم شبه شیگا موجب اسهال خونی میشود. زیرواحد B انتروتوکسین کلره در باکتری ویبریوکلرا در ایجاد بیماری اسهال نقش بهسزایی دارد.بهاحتمال با ترکیب اپی-توپهای CtxB، LtB و StB (LSC) و تولید واکسن تری والان میتوان آنتیبادی اختصاصی تری برای مقابله با این سموم ایجاد کرد. هدف از این تحقیق تکثیر ژن کایمر lsc جهت کلونینگ در وکتور pcDNA3.1(+) بهمنظور طراحی DNA واکسن و بررسی بیان در وکتور یوکاریوتیک است.
مواد و روش ها: توالی ژن lsc پس از طراحی پرایمر و تکثیر بهوسیله PCR به وکتورpcDNA3.1(+) منتقل شد. وکتور pcDNA3.1(+) و محصول PCR با استفاده از آنزیم HindIII و EcoRI مورد هضم قرار گرفت. کلونینگ ژن lsc در وکتورpcDNA3.1(+) و PCR انجام شد. کلونها مورد هضم آنزیمی قرار گرفتند. جهت اطمینان از بیان ژن lsc به سلول HEK-293T منتقل و با استفاده از روش وسترن بلاتینگ مورد تأیید قرار گرفت.
یافته ها: ژن lsc پس از PCR و کلونینگ در وکتورpcDNA3.1(+) با استفاده از هضم آنزیمی مورد تأیید قرار گرفت و قطعهای بهطول bp933 رویت و تأیید شد. سپس با استفاده از کیت توربوفکت به سلول HEK-293T منتقل و بیان پروتئین نوترکیب به روش وسترن بلاتینگ مورد تأیید قرار گرفت و پروتئین به وزن 39 کیلودالتون تأیید شد.
نتیجه‌گیری: نتایج بهدست آمده از ژن کایمر بهخوبی در لاین سلولی بیان و توسط وسترن بلاتینگ تأیید شد که میتواند کاندید مناسبی برای مقابله با عفونت باکتریایی باشد.
مواد و روش ها: توالی ژن lsc پس از طراحی پرایمر و تکثیر بهوسیله PCR به وکتورpcDNA3.1(+) منتقل شد. وکتور pcDNA3.1(+) و محصول PCR با استفاده از آنزیم HindIII و EcoRI مورد هضم قرار گرفت. کلونینگ ژن lsc در وکتورpcDNA3.1(+) و PCR انجام شد. کلونها مورد هضم آنزیمی قرار گرفتند. جهت اطمینان از بیان ژن lsc به سلول HEK-293T منتقل و با استفاده از روش وسترن بلاتینگ مورد تأیید قرار گرفت.
یافته ها: ژن lsc پس از PCR و کلونینگ در وکتورpcDNA3.1(+) با استفاده از هضم آنزیمی مورد تأیید قرار گرفت و قطعهای بهطول bp933 رویت و تأیید شد. سپس با استفاده از کیت توربوفکت به سلول HEK-293T منتقل و بیان پروتئین نوترکیب به روش وسترن بلاتینگ مورد تأیید قرار گرفت و پروتئین به وزن 39 کیلودالتون تأیید شد.
نتیجه‌گیری: نتایج بهدست آمده از ژن کایمر بهخوبی در لاین سلولی بیان و توسط وسترن بلاتینگ تأیید شد که میتواند کاندید مناسبی برای مقابله با عفونت باکتریایی باشد.
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی |
موضوع مقاله:
سلولی و مولکولی
دریافت: 1398/11/5 | پذیرش: 1400/2/21 | انتشار: 1400/3/31
دریافت: 1398/11/5 | پذیرش: 1400/2/21 | انتشار: 1400/3/31
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
