دوره 11، شماره 42 - ( 1-1400 )                   جلد 11 شماره 42 صفحات 83-94 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


گروه ژنتیک، دانشگاه پیام نور واحد ری، تهران، ایران
چکیده:   (197 مشاهده)
سابقه‌ و هدف: اسهال دومین عامل رایج مرگ و میر کودکان زیر 5 سال است. مهم­ترین سویه­های بیماری­زایی اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک با تولید سم Lt و St موجب بیماری اسهال مسافران و اشریشیاکلی انتروهموراژیک با ترشح سم شبه شیگا موجب اسهال خونی می­شود. زیرواحد B انتروتوکسین کلره در باکتری ویبریوکلرا در ایجاد بیماری اسهال نقش به­سزایی دارد.به­احتمال با ترکیب اپی-توپ­های CtxB، LtB و StB (LSC) و تولید واکسن تری والان می­توان آنتی­بادی اختصاصی تری برای مقابله با این سموم ایجاد کرد. هدف از این تحقیق تکثیر ژن کایمر lsc جهت کلونینگ در وکتور pcDNA3.1(+) به­منظور طراحی DNA واکسن و بررسی بیان در وکتور یوکاریوتیک است.
 
مواد و روش­ ها: توالی ژن lsc پس از طراحی پرایمر و تکثیر به­وسیله PCR به وکتورpcDNA3.1(+) منتقل شد. وکتور pcDNA3.1(+) و محصول PCR با استفاده از آنزیم HindIII و EcoRI مورد هضم قرار گرفت. کلونینگ ژن lsc در وکتورpcDNA3.1(+) و PCR انجام شد. کلون­ها مورد هضم آنزیمی قرار گرفتند. جهت اطمینان از بیان ژن lsc به سلول HEK-293T منتقل و با استفاده از روش وسترن بلاتینگ مورد تأیید قرار گرفت.
 
یافته­ ها: ژن lsc پس از PCR و کلونینگ در وکتورpcDNA3.1(+) با استفاده از هضم آنزیمی مورد تأیید قرار گرفت و قطعه­ای به­طول  bp933 رویت و تأیید شد. سپس با استفاده از کیت توربوفکت به سلول HEK-293T منتقل و بیان پروتئین نوترکیب به روش وسترن بلاتینگ مورد تأیید قرار گرفت و پروتئین به وزن 39 کیلودالتون تأیید شد.
 
نتیجه‌گیری: نتایج به­دست آمده از ژن کایمر به­خوبی در لاین سلولی بیان و توسط وسترن بلاتینگ تأیید شد که می­تواند کاندید مناسبی برای مقابله با عفونت باکتریایی باشد.
واژه‌های کلیدی: همسانه‌سازی، ژن lsc، DNA واکسن، IAU science
متن کامل [PDF 535 kb]   (26 دریافت) |   |   متن کامل (HTML)  (15 مشاهده)  
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی | موضوع مقاله: سلولی و مولکولی
دریافت: 1398/11/5 | پذیرش: 1400/2/21 | انتشار: 1400/3/31