دوره 3، شماره 9 - ( 11-1391 )                   جلد 3 شماره 9 صفحات 35-29 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Mirzaei N, Rezaei F. Cloning Influenza m2e- Vibrio cholera ctxB fusion fragment in pET28a plasmid. NCMBJ. 2013; 3 (9) :29-35
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-286-fa.html
میرزایی نیما، رضائی فرهاد. کلون کردن قطعه اتصالی m2e آنفلوانزا- ctxB ویبریو کلرا در پلاسمید pET28a. مجله تازه هاي بيوتكنولوژي سلولي و مولكولي. 1391; 3 (9) :35-29

URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-286-fa.html


دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران، باشگاه پژوهشگران جوان، تهران، ایران ، nm_mirzaei@yahoo.com
چکیده:   (24083 مشاهده)

سابقه و هدف: از آنجا که دومین خارجی پروتئین ماتریکس آنفلونزا ایمونوژن ضعیفی است انتخاب مناسبی جهت تولید واکسن نمی باشد. زیرواحد B انتروتوکسین وبا بخش غیر سمی و موجب اتصال هولوتوکسین به GM1 موجود در سطح سلول های اپیتلیال روده می شود. CTB به شدت ایمونوژن می باشد. از اینرو اتصال این دو ژن کاربرد زیادی در تهیه واکسن نوترکیب آنفلونزا خواهد داشت.

مواد و روش ها: از طریق PCR و با استفاده از پرایمر های اختصاصی حاوی جایگاه برش آنزیم محدود کننده ژن ctxB تکثیر شد. سویه استاندارد آنفلونزا نوع A ( A/ PUERTO RICO /8/34 ) تهیه و ژن M2e از طریق RT-PCR و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی حاوی جایگاه برش تکثیر گردید. جهت اتصال دو ژن ctxB و M2e واکنش PCR دوم به وسیله پرایمر R ژن ctxB و پرایمر F ژن M2e انجام گرفت. محصول PCR با استفاده از آنزیم های BamH1 و EcoR1 هضم و در وکتور pET28a کلون گردید. تائید کلونینگ با استفاده تعیین توالی صورت گرفت. پس از تائید، وکتور نوترکیب pET28a/M2e-ctxB در باکتری E.coli سویه Top10 ترانسفورم گردید. تائید نهایی فیوژن، کلونینگ و ترانسفورمیشن از طریق PCR کلنی، هضم آنزیمی و تعیین توالی صورت گرفت.

یافته ها: آنالیز توالی نشان داد ژن M2e در فریم مناسب به ژن ctxB متصل شده بود. علاوه بر این ژن حاصل در محل برش آنزیم های BamH1 و EcoR1 در وکتور pET28a کلون گردیده بود.

نتیجه گیری: از آنجا که توالی ژن M2e آنفلونزا دچار تغییرات آنتی ژنیک سالیانه نمی شود کاندید مناسبی جهت تولید واکسن آنفلونزا می باشد.با توجه به اینکه M2e ایمونوژن بسیار ضعیفی می باشد فیوژن آن با ایمونوژن های قوی مانند CTB می تواند روشی نوین در تهیه واکسن نوترکیب آنفلونزا باشد.

متن کامل [PDF 614 kb]   (4836 دریافت)    
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی | موضوع مقاله: ژنتیک
دریافت: 1391/11/28 | انتشار: 1391/11/27

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA

ارسال پیام به نویسنده مسئول


بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.

کلیه حقوق این وب سایت متعلق به مجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولی می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق

© 2022 CC BY-NC 4.0 | New Cellular and Molecular Biotechnology Journal

Designed & Developed by : Yektaweb