RT - Journal Article T1 - Design and production of a genetically simulant construct for the detection of B. malei and pseudomaleii JF - NCMBJ YR - 2020 JO - NCMBJ VO - 10 IS - 40 UR - http://ncmbjpiau.ir/article-1-1316-fa.html SP - 65 EP - 76 K1 - pathogens K1 - Burkholderia K1 - Real Time PCR K1 - cloning K1 - SYBR Green K1 - IAU science. AB - سابقه و هدف: باکتری های بورخولدریا مالئی و سودومالئی (Burkholderia mallei and pseudomallei species) جزو عوامل بیماری زای خطرناک انسانی محسوب می شوند. تشخیص برپایه کشت برای این باکتری، هزینه بر و زمان بر و از طرف دیگر کار با این باکتری بسیار خطرناک بوده و همچنین امکان دسترسی به این باکتری و حتی ژنوم آن بسیار مشکل می باشد. هدف از انجام این مطالعه طراحی و سنتز کنترل مثبتی ایمن و کارآمد برای تشخیص باکتری بورخولدریا می باشد. مواد و روش ها: در ابتدا، یک سازه شبیه ساز که، حاوی ژن های مرجع و اختصاصی باکتری بورخولدریا مالئی و سودومالئی می باشد و در دیگر گونه های خانواده مشاهده نمیشود ساخته شد و سپس کارایی عملیاتی سازه طراحی شده، با استفاده از روشPCR Real-Time کمی ( با استفاده از رنگ SYBER Green ) و کیفی(با استفاده از پروب TaqMan )، مورد ارزیابی قرار گرفت. درنهایت محصولات تکثیری PCR Real-Time با استفاده از منحنی ذوب و الکتروفورز مورد بررسی قرار گرفتند. یافته ها: میزان حداقل و حداکثر حساسیت به ترتیب 1/0پیکو گرم و 10 نانوگرم بر روی سازه طراحی شده در مطالعه حاضر، حاصل شد. نتیجه گیری: این سازه شبیه ساز میتواند به عنوان کنترل مثبت مناسبی، جهت تشخیص عامل بورخولدریا مورد استفاده قرار گیرد و همچنین می تواند در آینده باعث پیشرفت هرچه بیشتر کیت های تشخیصی جدید در این حوزه بشود. LA eng UL http://ncmbjpiau.ir/article-1-1316-fa.html M3 ER -