New Cellularand Molecular Biotechnology Journal

fa بهینه سازی ترسیب توکسوئید دیفتری به‌منظور ارتقاء واکسن به‌وسیله آمونیوم-سولفات فوق اشباع OPTIMIZATION OF DIPHTHERIA TOXOID PRECIPITATION BY USING SATURATED AMMONIUM SULPHATE IN ORDER TO IMPROVE DIPHTHERIA VACCINE سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <a name="_GoBack">سابقه و هدف:</a> کورینه باکتریوم دیفتریه باکتری هوازی و بیهوازی اختیاری است. مهمترین گونه از خانواده کورینه ‌باکتریاها، عامل بیماری دیفتری است که به وسیله توکسین خود، بیماری دیفتری را ایجاد میکند. آمونیم سولفات نمکی معدنی است که از آن برای ترسیب و خالصسازی پروتئین ها استفاده میشود که با افزایش مقدار نمک حلالیت پروتئینی کم شده و پروتئین ها به واسطه قطعه های هیدروفوب خود، بههم پیوسته و رسوب میکنند. واکسن دیفتری از طریق تخلیص و ترسیب توکسوئید باکتری دیفتری تهیه می شود که از جمله روشهای ترسیب، استفاده از آمونیوم سولفات بهصورت نمک خشک و یا تهیه محلول فوق اشباع از آن است. مواد و روش ها: کشت باکتری دیفتری در شرایط بهینه و مغذی سبب افزایش تولید توکسین توسط باکتری میشود و بعد از غیرفعال سازی توکسین و تبدیل آن به توکسوئید در صنایع تولید واکسن مورد استفاده قرار میگیرد. کلیه محیطهای کشت باید حداقل بهمدت 24 ساعت در حرارت 37-35 درجه سانتیگراد انکوبه شوند. به منظور ترسیب توکسوئید باکتری از محلول فوق اشباع 32/4 مولار آمونیوم با درصدهای مختلف سولفات استفاده شد. نتایج بهدست آمده از این روش باSDS PAGE و (Lateral flow test) Lf TEST مورد بررسی قرار گرفت. یافتهها: استفاده از آمونیومسولفات فوق اشباع32/4 مولار به جای استفاده از نمک خشک آمونیومسولفات که در روش سنتی (WHO TRS, No.980) که قبل در صنایع واکسن سازی مورد استفاده قرار میگرفت، باعث حذف مرحله طولانی مدت دیالیز شده و از طرفی هدر رفت محصول نهایی (توکسوئید) را به صورت کامل محسوس کاهش داده و همچنین باعث حذف ناخالصی های ناخواسته از محصول نهایی شده و محصول نهایی خالص تر را در مقیاس بیشتر در اختیار قرار داده است. نتیجه گیری: از آنجاییکه هدف در صنایع تولید واکسن، دستیابی به مقدار حداکثری توکسوئید از این باکتری است لذا استفاده از آمونیوم سولفات فوق اشباع 32/4 مولار برای ترسیب توکسوئید دیفتری به جای استفاده از نمک خشک آمونیوم سولفات باعث کاهش هدر رفت محصول نهایی و حذف مرحله زمان بر و غیر اقتصادی دیالیز شده و از نظر اقتصادی نیز مقرون به صرفه تر خواهد بود. Aim and Background: Diphtheria toxin is an extracellular protein of Corynebacterium diphtheria that inhibits protein synthesis and kills susceptible cells. Ammonium sulfate is an inorganic salt that is used to purify and precipitate proteins, which, by increasing salt content, decreases the solubility of proteins, and proteins interconnect and precipitate through their hydrophobic parts. Diphtheria vaccine is prepared by purifying and treating toxoid diphtheria bacteria, which is one of the methods of treating, using ammonium sulfate as a dry salt or preparing an over-saturated solution. Material and Methods: Diphtheria bacteria grown in optimal conditions and increased nutrient and toxin production by bacteria and inactivating the toxin into toxoid, in the manufacture of the vaccine is use. All media must be at least 24 hours at a temperature of 37-35°C will be incubated. In order to bacterial toxoid deposition of supersaturated solution 4.32 M ammonium sulfate with different percentages were used. The results of this procedure were investigated using SDS PAGE and Lf TEST ( Lateral Flow Test). Results: Results revealed the use of 4.32 M supersaturated ammonium sulfate instead of the use of dry salt of ammonium sulfate, used in the traditional method (WHO TRS, No. 980), used previously in the vaccine industry, Eliminating the long-term dialysis phase On the other hand, the final product (toxoid) has been tediously reduced It also removes unwanted impurities from the finished product And has made the net product even more scalable. Conclusion: Since the purpose of vaccine production is industry to achieve maximum toxoid of the bacteria, so use the procedure in this research project (optimizing of DT toxin precipitation by 4.32 M super saturation of ammonium sulphate) , in addition to reducing the loss of the final product and remove the prolonged dialysis stage and so the economy will become more affordable. واکسن, دیفتری, ترسیب, توکسوئید, آمونیوم‌سولفات Vaccine, Diphtheria, Precipitation, Toxoid, Ammonium sulphate 95 103 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-1219-2&slc_lang=fa&sid=1 Meisam Akrami میثم اکرمی 10031947532846008497 10031947532846008497 Yes Department of Biology,Faculty of Science,Islamic Azad University Central Tehran Branch,Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد تهران مرکزی، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران Mojtaba Noofeli مجتبی نوفلی 10031947532846008498 10031947532846008498 No Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی، تحقیقات کشاورزی، سازمان آموزش و پژوهش و توسعه (AREEO) ،کرج، ایران Mitra Sadat Tabatabaei میترا السادات طباطبایی 10031947532846008499 10031947532846008499 No Department of Biology,Faculty of Science,Islamic Azad University Central Tehran Branch,Iran گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد تهران مرکزی، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران