New Cellularand Molecular Biotechnology Journal

fa مقایسه بازدهی ترانسفکشن وایروزوم کاتیونیک مشتق شده از ویروس وزیکولار استوماتیتیس و دو معرف ترانسفکشن تجاری در رده‌های سلولی HEK-293 و Vero Comparison of the transfection efficiency of cationic virosome derived from vesicular stomatitis virus and the two commercial transfection reagents in HEK-293 and Vero cell lines فیزیولوژی Physiology مقاله پژوهشی Research Article سابقه و هدف: تحویل موفقیت آمیز یک ژن به سلول هدف مستلزم ایجاد یک سیستم انتقال ژن ایمن تر و کارآمدتر است. این مطالعه با هدف ارزیابی کارایی ترانسفکشن وایروزوم کاتیونیک مشتق شده از ویروس وزیکولار استوماتیتیس (VSV) به عنوان یک نانوحامل هیبریدی در مقایسه با دو معرف ترانسفکشن تجاری از جمله لیپوفکتامین 2000 و GenJet™ در دو رده سلولی HEK-293 و Vero انجام شد. مواد و روش ها: بازدهی ترانسفکشن وایروزوم کاتیونیک VSV، لیپوفکتامین 2000 و GenJet™ در دو رده سلولی HEK-293 و Vero با استفاده از ترانسفکشن پلاسمید pEGFP-N1، میکروسکوپ فلورسنت و تکنیک فلوسایتومتری مورد ارزیابی قرار گرفت. همچنین، میزان سمیت وایروزوم کاتیونیک و معرف های تجاری ترانسفکشن به وسیله آزمون MTT بررسی گردید. اثر مهاری NH4Cl بر روی بازده ترانسفکشن وایروزوم به وسیله میکروسکوپ فلورسنت و فلوسایتومتری آنالیز گردید. یافته ها: یافتههای ما نشان داد که بالاترین سطح بیان EGFP در سلول های ترانسفکت شده با لیپوفکتامین 2000 بدست آمد. بازده ترانسفکشن در هر دو رده سلولی ترانسفکت شده با وایروزوم/ pEGFP-N1 در مقایسه با pEGFP-N1/GenJetTM افزایش معنی داری داشت<a name="_Hlk170550515">) </a>0.01 > P , <a name="_Hlk170548489"> </a>0.05 >( P . به علاوه، نتایج آنالیز زنده مانی سلولی به وسیله MTT با نتایج بدست آمده از ارزیابی بازده ترانسفکشن تطابق داشت. سلول های ترانسفکت شده با لیپوفکتامین 2000 بالاترین میزان زنده مانی را از خود نشان دادند. زنده مانی سلولی در سلول های ترانسفکت شده با وایروزوم کاتیونیک VSV در مقایسه با سلول های ترانسفکت شده با GenJet™ به طور قابل توجهی بالاتر بود ( 0.05 >( P . نتایج نشان داد که در سلولهای HEK-293 تیمار شده با NH4Cl، ترانسفکشن مهار گردید. نتیجه گیری: وایروزوم کاتیونیک مشتق شده از ویروس VSV حاوی VSV-G یک نانوحامل هیبریدی کارآمد با تروپیسم سلولی وسیع است که بینشی جدید در مورد کاربرد به عنوان یک سیستم تحویل ژن در مطالعات ژن درمانی ارائه می دهد.   Abstract Aims and Background: Successful delivery of a gene to a target cell requires the development of a safer and more efficient gene transfer system. This study aimed to evaluate the transfection efficiency of cationic virosome derived from vesicular stomatitis virus (VSV) as a hybrid nano-carrier compared to two commercial transfection reagents including Lipofectamine™ 2000 and, GenJet™ in HEK-293 and, Vero cell lines. Material and Methods: The transfection efficiency of VSV cationic virosome, Lipofectamine™ 2000, and GenJet™ was evaluated in HEK-293 and Vero cell lines using pEGFP-N1 plasmid transfection, fluorescent microscopy, and flow cytometry methods. Also, the toxicity of cationic virosome and commercial transfection reagents was investigated by the MTT test. The inhibitory effect of NH4Cl on virosome transfection efficiency was analyzed by fluorescent microscopy and flow cytometry. Results: Our findings showed that the highest level of EGFP expression was obtained in cells transfected with Lipofectamine™ 2000. Transfection efficiency was significantly increased in both cells transfected with virosome/pEGFP-N1 compared to pEGFP-N1/GenJet™ (P< 0.05, P< 0.01). In addition, the results of cell viability analysis by MTT were consistent with the results obtained from the evaluation of transfection efficiency. Cells transfected with lipofectamine™ 2000 showed the highest survival rate. Cell viability was significantly higher in cells transfected with VSV cationic virosomes compared to cells transfected with GenJet™ (P< 0.05). The results showed that transfection was inhibited in HEK-293 cells treated with NH4Cl. Conclusion: VSV-derived cationic virosome containing VSV-G is an efficient hybrid nanocarrier with broad cellular tropism, which provides new insight into its application as a gene delivery system in gene therapy studies.   وایروزوم, ترانسفکشن, نانوحامل, ویروس وزیکولار استوماتیتیس, ژن درمانی, لیپوفکتامین 2000, GenJet™, Iau Science. Virosome, Transfection, Nanocarrier, Vesicular stomatitis virus, Gene therapy, Lipofectamine™ 2000, GenJet™, Iau Science. 41 51 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-1921-2&slc_lang=fa&sid=1 Delaram Ahmadi دلارام احمدی 100319475328460014722 100319475328460014722 No Mohsen Zargar محسن زرگر zargar@qom-iau.ac.ir 100319475328460014723 100319475328460014723 Yes Department of Microbiology, Faculty of Basic Science, Qom Branch, Islamic Azad University, Qom, Iran گروه میکروب شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد قم، دانشگاه آزاد اسلامی، قم، ایران Mohammad Reza Zolfaghari محمدرضا ذوالفقاری 100319475328460014724 100319475328460014724 No Monireh Kazemimanesh منیره کاظمی منش 100319475328460014725 100319475328460014725 No Amir Ghaemi امیر قائمی 100319475328460014726 100319475328460014726 No Department of Influenza and other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش آنفلوانزا و ویروس‌های تنفسی شایع، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران