fa طراحی روشی نوین بر پایه پپتید های تراوا کننده غشا جهت افزایش بازدهی انتقال DNA خارجی به باکتری اشرشیاکولی سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <b> سابقه و هدف:</b> انتقال DNA خارجی با بازدهی بالا به داخل باکتری از مهمترین مراحل در زیست فناوری میکروبی می‌باشد. برای این منظور چند روش مرسوم است که در بین آن‌ها روش کلسیم کلراید سرد از جمله مهمترین و ارزان‌ترین روش‌ها جهت انتقال DNA به درون سلول‌های باکتریایی گرم منفی مانند Escherichia coli می‌باشد. به طور معمول بازدهی انتقال DNA در این روش107- 105 کلونی برای یک میکروگرم از DNA خارجی می‌باشد. با توجه به اهمیت فرایند انتقال DNA، تلاش‌های بسیاری به منظور بهینه‌سازی روش‌های مرسوم همچون کلرید کلسیم صورت گرفته است. در این مطالعه نشان دادیم با استفاده از یک پپتید کاتیونیک تراوا کننده غشاء (CM11) و بر پایه روش استاندارد کلرید کلسیم، می‌توان DNA خارجی را با بازدهی بالاتری به درون باکتری E.coli انتقال داد. <div style="direction: rtl"><b>مواد و روش ها:</b> سلول‌های باکتریایی توسط غلظت‌های متفاوت پپتید ( 5/0، 1 ،2 ،3 و 6 میکرو‌گرم در میلی‌لیتر) و به دو روش متفاوت و بر پایه مستعدسازی توسط کلرید کلسیم، تیمار شدند. سپس پلاسمیدهای pET-28a(+), pGEX4T-1 وpUC19 به عنوان مدل و به صورت جداگانه به درون باکتری مستعد شده منتقل گردیدند. <div style="direction: rtl"><b>یافته ها: </b>نتایج نشان داد که بالاترین بازدهی انتقال پلاسمید برای باکتری‌های مستعد شده در حضور غلظت 1 میکروگرم در میلی‌لیتر پپتید بدست می‌آید. در این غلظت افزایش انتقال برای پلاسمیدهای pET-28a(+), pGEX4T-1 وpUC19 به ترتیب 4/4، 7/4 و 4 برابر نمونه کنترل بود.  </div><div style="direction: rtl"><b>نتیجه‌گیری:</b> این مطالعه نشان داد که پپتید CM11 به عنوان یک پپتید تراوا کننده غشاء سلول می‌تواند باعث افزایش کارامدی انتقال DNA به درون باکتری E. coli با استفاده از مستعدسازی به روش شیمیایی کلرید کلسیم گردد. </div></div> <b> Aim and Background:</b> High efficient transformation of external DNA into the bacterial cells accounts as the main step of microbial biotechnology. For this purpose, some conventional methods have been developed. Using cold CaCl2 is one of the most important and cheapest ways for DNA transformation into the gram negative bacteria such as Escherichia coli. Commonly used methods have a low transformation rate about 105 to 107 transformants per 1μg of DNA. Due to the importance of DNA transformation procedure, numerous attempts have been applied to optimize the conventional methods such as cold CaCl2. In this study we showed that it is possible to increase DNA transformation efficiency into the E. coli in standard CaCl2 method, using a membrane permeable cationic peptide (CM11). <b>Material and methods:</b> Based on ClCa2 competent cell preparation method, the bacterial cells were treated by different concentration of peptide (0.5, 1, 2, 3 and 6 μg/ml) in two different ways. Thereafter pET-28a (+), pGEX4T-1 and pUC19 as model plasmids were separately transformed into the competent cells. <div><b>Results:</b> Results showed that the highest plasmid transformation efficiency obtained at the present of 1 μg/ml of peptide. In this concentration, the transformation efficiency of pET-28a (+), pGEX4T-1 and pUC19 plasmids were respectively 4.4, 4.7 and 4 fold higher than control sample. <div><b>Conclusions:</b> The results of this study revealed that in the chemical cold CaCl2 strategy for DNA transformation, CM11 as a cell membrane permeable peptide can increase the efficiency of DNA transformation into E. coli. </div></div> ترانسفورماسیون, پپتید CM11, پلاسمید, اشرشیا کولی CM11, Escherichia Coli, Peptide, Transformation 99 108 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-411-2&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Heiat محمد هیئت 10031947532846003308 10031947532846003308 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) – تهران - ایران Mohammad Eftekhari محمد افتخاری‌شیر کوهی 10031947532846003309 10031947532846003309 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) – تهران - ایران Hossein Aghamollaei حسین آقاملایی 10031947532846003310 10031947532846003310 No Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) – تهران - ایران Mehrdad Moosazadeh Moghaddam مهرداد موسی زاده مقدم mm.genetics@gmail.com 10031947532846003311 10031947532846003311 Yes Applied Biotechnology Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج) – تهران - ایران