fa دورگه سازی در محل بر روی جنین جوجه ژنتیک Genetics مقاله پژوهشی Research Article <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>سابقه و هدف:</strong> تکنیک &nbsp;دورگه سازی در محل بر روی جنین <span dir="LTR">(wmISH)</span> یکی از ابزار های قدرتمند در بررسی جایگاه بیان رونوشت ژن در بافت های جنینی است. این مطالعه با هدف راه اندازی این تکنیک با استفاده از کاوشگر ضد الگوی آنزیم <span dir="LTR">RALDH2</span> که با دیگوکسی ژنین نشاندار شده بود انجام شد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>مواد و روش ها:</strong> پس از جداسازی جنین جوجه در مراحل ابتدایی تکوین، آنها فیکس و آبگیری شدند و پس از بیرنگ شدن و تاثیر پروتئین کیناز <span dir="LTR">K</span> بر آنها ابتدا محلول دورگه سازی و بعد محلول دورگه سازی حاوی کاوشگر ضد الگوی آنزیم <span dir="LTR">RALDH2</span>&nbsp; به مدت 36 ساعت بر آنها تاثیر داده شد. در نهایت پس از شستشو با محلول <span dir="LTR">SSC</span> و انکوبه شدن با آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین&nbsp; به آنها محلول <span dir="LTR">NBT/BCIP</span> افزوده شد و جنین ها به محیط بافری <span dir="LTR">NTMT</span> &nbsp;منتقل شدند. به دسته از جنین ها کاوشگر الگوی این آنزیم اضافه شد و به جنین های کنترل منفی نیز هیچ گونه کاوشگری افزوده نشد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>یافته ها:</strong> &nbsp;پس از گذشت 36 ساعت به دنبال اتصال کاوشگر ضد الگوی آنزیم <span dir="LTR">RALDH2</span> به رونوشت های این آنزیم در سومایت های جنینی و نیز لوله های عصبی و قلبی جنین جایگاه حضور این رونوشت ها در بافت های مذکور به رنگ آبی مشاهده شدند. در گروه هایی که کاوش گر الگو اضافه شده بود و نیز گروه کنترل منفی سومایت ها و بافت عصبی رنگ نگرقته بودند.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong>نتیجه گیری:</strong> با استفاده از تکنیک&nbsp; <span dir="LTR">wmISH</span> &nbsp;می توان ارزیابی دقیقی از مکان و میزان بیان رونوشت ژن ها در جنین به دست آورد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: left;"><strong><span dir="LTR">Aim & &nbsp;Background</span></strong><span dir="LTR">: whole-mount in situ hybridization (wmISH) is a powerful tool to visualize the gene transcript in embryonic tissue. This study aimed at setting up wmISH using digoxygenine-labled RALDH2 antisense riboprobe.</span></p> <p dir="RTL" style="text-align: left;"><strong><span dir="LTR">Methods & Materials:</span></strong><span dir="LTR"> The early developing chick embryos were fixed and dehydrated upon dissecting. Following bleaching and protein kinase K treatment, the embryos were hybridized with hybridization buffer and then with the buffer containing RALDH2 antisense riboprobe for 36h. Upon washing with SSC solution and incubation with anti-digoxygenin Ab, the embryos were treated with NBT/BCIP and transferred to NTMT buffer. Some embryos received sense ribobrobe and negative control was considered as a group not treated with any riboprobes.</span></p> <p dir="RTL" style="text-align: left;"><strong><span dir="LTR">Results: </span></strong><span dir="LTR">Following binding the antisense riboprobe to RALDH2 transcript, blue color appeared in somites and neural tube as well as the cardiac tube. No color was detected in the embryonic tissue treated with the sense riboprobe or in untreated group.</span></p> <p dir="rtl" style="text-align: justify;"></p> دورگه سازی در محل بر روی جنین, کاوشگر RNA نشاندارشده با دیگوکس ژنین whole-mount in situ hybridization, digoxygenin-labled riboprobe 29 34 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-787-2&slc_lang=fa&sid=1 Mohsen Sagha محسن سقا m.sagha@arums.ac.ir 10031947532846005255 10031947532846005255 Yes Research Laboratory for Embryology and Stem Cells, Department of Anatomical Sciences and Pathology, School of Medicine, Ardabil University of Medical Sciences, Ardabil, Iran آزمایشگاه تحقیقاتی جنین شناسی و سلولهای بنیادی، گروه علوم تشریحی و پاتولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اردبیل، اردبیل، ایران Azadeh Aghvami Tehrani آزاده اقوامی تهرانی 10031947532846005256 10031947532846005256 No Research Laboratory for Embryology and Stem Cells, Department of Anatomical Sciences and Pathology, School of Medicine, Ardabil University of Medical Sciences, Ardabil, Iran آزمایشگاه تحقیقاتی جنین شناسی و سلولهای بنیادی، گروه علوم تشریحی و پاتولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اردبیل، اردبیل، ایران Mohammad Ghasem Golmohammadi محمد قاسم گل محمدی 10031947532846005257 10031947532846005257 No Research Laboratory for Embryology and Stem Cells, Department of Anatomical Sciences and Pathology, School of Medicine, Ardabil University of Medical Sciences, Ardabil, Iran آزمایشگاه تحقیقاتی جنین شناسی و سلولهای بنیادی، گروه علوم تشریحی و پاتولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اردبیل، اردبیل، ایران