fa همسانه سازی تمام طول ژن E2 از ژنوتیپ 2a استرین JFH1 ویروس هپاتیت سی درون وکتور pET28a(+) و انتقال آن به باکتری اشریشیاکلی سویه DH5α سلولی و مولکولی Cellular and molecular مقاله پژوهشی Research Article <p dir="RTL"><strong>سابقه و هدف:</strong> پوشش گلیکوپروتئینی <span dir="LTR">E2</span> ویروس هپاتیت سی برای ورود ویروس به سلول های میزبان مورد نیاز است، همچنین به دلیل اختلاف توالی نوکلئوتیدی در ناحیه <span dir="LTR">C</span> ترمینال ژن <span dir="LTR">E2</span> تنوع ویروسی به وجود می آید که موجب پایداری عفونت می گردد، در نتیجه این ژن هدف اصلی برای تولید آنتی بادی های خنثی کننده و ساخت واکسن می باشد. در این تحقیق نیز جهت مطالعات مقدماتی، تمام طول ژن <span dir="LTR">E2</span> از ژنوتیپ <span dir="LTR">2a</span> استرین <span dir="LTR">JFH1</span> ویروس هپاتیت سی درون وکتور<span dir="LTR">pET28a(+)</span> قرار گرفته و به درون باکتری <span dir="LTR">E-coli</span> انتقال یافته است.</p> <p dir="RTL"><strong>مواد و روش ها:</strong> ژن ناحیه <span dir="LTR">E2</span> از ژنوتیپ<span dir="LTR">2a </span>&nbsp;استرین <span dir="LTR">JFH1</span> ویروس هپاتیت سی پس از طراحی پرایمرهای دارای جایگاه آنزیم های محدودگر <span dir="LTR">EcoR1</span> و <span dir="LTR">Nde1</span> توسط واکنش <span dir="LTR">PCR</span> تکثیر گردید و محصول آن پس از تائید درون وکتور<span dir="LTR">pET28a(+)</span> نوترکیب گشت، سپس به روش شوک حرارتی درون سلول باکتری<span dir="LTR"> E-coli </span>سویه <span dir="LTR">DH5</span><span dir="LTR">&alpha;</span>، ترانسفورم شده و تائید گردید.</p> <p dir="RTL"><strong>یافته ها:</strong> همسانه سازی ژن <span dir="LTR">E2</span> به صورت تمام طول درون وکتور<span dir="LTR">pET28a(+)</span> با موفقیت انجام شد و سازه نوترکیب (<span dir="LTR">pET28a &ndash; E2</span>) به درون سلول باکتری<span dir="LTR">E-coli DH5&alpha; </span>&nbsp;منتقل شده و تائید گردید.</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه گیری</strong>: ساخت وکتور نوترکیب <span dir="LTR">pET28a(+)</span> دارای ناحیه تمام طول ژن <span dir="LTR">E2</span> از ژنوتیپ <span dir="LTR">2a</span> استرین <span dir="LTR">JFH1</span> ویروس هپاتیت سی و انتقال به درون باکتری <span dir="LTR">E-coli</span> این امکان را فراهم می کند تا جهت بیان ژن مزبور در سویه های بیانی از این وکتور نوترکیب استفاده شود.</p> <p><strong>Aim and Background:</strong> The envelope glycoprotein E2 in Hepatitis C virus is required for host-cell entry. The nucleotide sequence diversity in carboxyl-terminus (C-terminal) of this gene results in induction of neutralizing antibody that makes this gene an important target for vaccine development studies. In this study we tried to make a recombinant pET28a (+) containing full length of the E2 gene from genotype 2a (JFH1) followed by being transformed into the E-coli (DH5a).</p> <p><strong>Material and Methods</strong><strong>:</strong> Full-length of HCV E2 region from genotype 2a (JFH1) was amplified by PCR reaction using the specific primers including the restriction sites for EcoR1 and Nde1. The confirmed PCR product was cloned into the pET28a (+) vector and transformed into the E-coli (DH5a) using the heat shock method.</p> <p><strong>Results:</strong> The HCV E2 gene was successfully cloned into the pET28a (+) vector in full length size. Transformation of the E-coli strain DH5a by this recombinant vector was confirmed.</p> <p><strong>Conclusion:</strong> Transformation of the E-coli (DH5a) using the recombinant vector pET28a- HCV 2a (JFH1) E2 gene provides useful tools for further expression of this gene in full length size in different expression system.</p> ویروس هپاتیت سی, تمام طول ژن E2, ژنوتیپ 2a استرین JFH1,, وکتورpET28a(+), باکتری E- coli. Hepatitis C Virus, E2 gene full-length, genotype 2a (JFH1), pET28a (+) vector, E-coli (DH5α). 17 22 http://ncmbjpiau.ir/browse.php?a_code=A-10-885-2&slc_lang=fa&sid=1 Sara Bagheri سارا باقری 10031947532846005826 10031947532846005826 No Biology Group, Payameh Nour University, Tehran, Iran. گروه زیست شناسی دانشکده علوم پایه دانشگاه پیام نور تهران ، ایران Pooneh Rahimi پونه رحیمی prahimi@pasteur.ac.ir 10031947532846005827 10031947532846005827 Yes Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. گروه ویروس شناسی ، بخش هپاتیت و ایدز ، انستیتو پاستور تهران ، ایران Rouhallah Vahabpour روح الاه وهاب پور 10031947532846005828 10031947532846005828 No Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. گروه ویروس شناسی ، بخش هپاتیت و ایدز ، انستیتو پاستور تهران ، ایران Seyed Mehdi Sadat سید مهدی سادات 10031947532846005829 10031947532846005829 No Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. گروه ویروس شناسی ، بخش هپاتیت و ایدز ، انستیتو پاستور تهران ، ایران Mohammad Reza Aghasadeghi محمدرضا آقا صادقی 10031947532846005830 10031947532846005830 No Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. گروه ویروس شناسی ، بخش هپاتیت و ایدز ، انستیتو پاستور تهران ، ایران Fatemeh Motevalli فاطمه متولی 10031947532846005831 10031947532846005831 No Department of Hepatitis and AIDS, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. گروه ویروس شناسی ، بخش هپاتیت و ایدز ، انستیتو پاستور تهران ، ایران