دوره 9، شماره 34 - ( 1-1398 )                   جلد 9 شماره 34 صفحات 23-30 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


1. دانشکده فنی مهندسی 2، دانشگاه آزاد اسلامی واحد تبریز
چکیده:   (1611 مشاهده)
سابقه و هدف: آنزیم گلوتامات اندوپپتیداز (EC 3.4.21.19) متعلق­به خانواده‌ سرین پروتئازها است. این آنزیم می­تواند با هیدرولیز اختصاصی پیوندهای پپتیدی در آنالیز ساختار پروتئین، سنتز پپتیدها به روش فاز جامد و تهیه نانوتیوب­ها مورد استفاده قرار گیرد. هدف از این مطالعه تولید آنزیم گلوتامات اندوپپتیداز باکتری Bacillus licheniformis SL-1 مقاوم­به حرارت که بومی ایران است است.
مواد و روش­ها: در این مطالعه بیان آنزیم گلوتامات اندوپپتیداز از باکتری Bacillus licheniformis SL-1 در E. coli BL21 i به­صورت پری­پلاسمی در دماهای ۱۶، ۲۰ و ۳۷ درجه سانتی­گراد و غلظت­های 4/0، ۱ و ۲ میلی­مولار القاگر بهینه سازی شد. با توجه­به این­که آنزیم نوترکیب تولید شده دارای دنباله هیستیدینی (His-tag) است از ستون نیکل سفارز برای تخلیص به روش کروماتوگرافی تمایلی استفاده گردید.
یافته­ ها: شرایط مختلف برای بیان آنزیم نوترکیب گلوتامات اندوپپتیداز بررسی گردید و بهترین نتایج برای بیان پری پلاسمیک و محلول آنزیم در میزبان E. coli BL21 در دمای ۳۷ درجه سانتی­گراد با غلظت ۲ میلی­مولار IPTG به­دست آمد.
نتیجه­ گیری: بررسی کیفی نتایج حاصل از بیان آنزیم تحت شرایط مختلف حاکی از آن­ست­که بیان پروتئین نوترکیب وابسته­به دما بوده و نیازمند غلظت­های بالای القاگرIPTG  است. مطالعه حاضر نتایج اولیه بررسی امکان تولید نوترکیب آنزیم گلوتامات اندوپپتیداز در سیستم بیانی E. coli BL21 است. برای تولید هر چه بهتر آنزیم گلوتامات اندوپپتیداز سایر پارامترهای مؤثر مانند سیستم­های بیانی و روش­های تخلیص جایگزین قابل بررسی و بهینه سازی است. 
 
متن کامل [PDF 447 kb]   (808 دریافت)    
نوع مطالعه: مقاله تحقیقی | موضوع مقاله: سلولی و مولکولی
دریافت: 1397/12/25 | پذیرش: 1397/12/25 | انتشار: 1397/12/25