زمینه و هدف: نقشِ کلیدیِ انکوپروتئینهای ویروسِ پاپیلومای انسانیِ نوعِ 16 (HPV16) در شدتِ بیماری و حتی تشخیصِ زودهنگامِ سرطانهای مرتبط با HPV16 بررسی شده است. هدف و تمرکزِ مطالعۀ حاضر روی کلونینگ و بیان یکی از انکوژنهای ویروس تحتِ عنوانِ E5 در سیستم E. coli بهمنظور تخلیص و تعیینِ عملکردِ آن در آینده میباشد.
مواد و روشها: در این پژوهش، کلون کردن ژنِ E5 ویروسِ پاپیلومای انسانی نوعِ 16 در وکتورِ بیانِ پروکاریوتی pET28a (plasmid expression T7) انجام شد. سپس، بیانِ پروتئینِ نوترکیبِ E5 در سیستمِ بیانیِ E. coli با استفاده از روشهای SDS-PAGE و وسترن بلات موردبررسی قرار گرفت.
نتایج: نتایج ما نشان دادند که ژنِ E5 کلونشده در وکتورِ بیانیِ pET28a (+) با اندازۀ 240 جفتباز، قادر به بیان در سیستمِ اشرشیاکلی سویۀ BL21 تحتِ شرایطِ دمای 37 درجۀ سانتیگراد، غلظتِ 5/0 میلیمولار IPTG و 18 ساعت پس از القاست. آنالیزِ SDS-PAGE و وسترن بلات حضور باندِ 10 کیلودالتونیِ مربوط به بیانِ پروتئینِ نوترکیبِ E5 را تأیید کردند.
نتیجهگیری: با توجه به بیانِ پروتئینِ E5 غنی از اسیدآمینههای آبگریز در سیستمِ بیانیِ باکتری و عدمنیاز به مدیفیکاسیون در این پروتئین نظیرِ فسفریلاسیون و گلیکوزیلاسیون، تخلیصِ پروتئینِ نوترکیب بهمنظورِ ارزیابیِ عملکردِ آن در طراحیِ واکسن در آینده صورت خواهد گرفت.
| بازنشر اطلاعات | |
|
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |