[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: جستجو :: ثبت نام :: ارسال مقاله :: تماس با ما ::
:: دوره 3، شماره 9 - ( 11-1391 ) ::
جلد 3 شماره 9 صفحات 29-35 برگشت به فهرست نسخه ها
کلون کردن قطعه اتصالی m2e آنفلوانزا- ctxB ویبریو کلرا در پلاسمید pET28a
نیما میرزایی ، فرهاد رضائی
دانشجوی دکتری دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران، باشگاه پژوهشگران جوان، تهران، ایران ، nm_mirzaei@yahoo.com
چکیده:   (16607 مشاهده)

سابقه و هدف: از آنجا که دومین خارجی پروتئین ماتریکس آنفلونزا ایمونوژن ضعیفی است انتخاب مناسبی جهت تولید واکسن نمی باشد. زیرواحد B انتروتوکسین وبا بخش غیر سمی و موجب اتصال هولوتوکسین به GM1 موجود در سطح سلول های اپیتلیال روده می شود. CTB به شدت ایمونوژن می باشد. از اینرو اتصال این دو ژن کاربرد زیادی در تهیه واکسن نوترکیب آنفلونزا خواهد داشت.

مواد و روش ها: از طریق PCR و با استفاده از پرایمر های اختصاصی حاوی جایگاه برش آنزیم محدود کننده ژن ctxB تکثیر شد. سویه استاندارد آنفلونزا نوع A ( A/ PUERTO RICO /8/34 ) تهیه و ژن M2e از طریق RT-PCR و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی حاوی جایگاه برش تکثیر گردید. جهت اتصال دو ژن ctxB و M2e واکنش PCR دوم به وسیله پرایمر R ژن ctxB و پرایمر F ژن M2e انجام گرفت. محصول PCR با استفاده از آنزیم های BamH1 و EcoR1 هضم و در وکتور pET28a کلون گردید. تائید کلونینگ با استفاده تعیین توالی صورت گرفت. پس از تائید، وکتور نوترکیب pET28a/M2e-ctxB در باکتری E.coli سویه Top10 ترانسفورم گردید. تائید نهایی فیوژن، کلونینگ و ترانسفورمیشن از طریق PCR کلنی، هضم آنزیمی و تعیین توالی صورت گرفت.

یافته ها: آنالیز توالی نشان داد ژن M2e در فریم مناسب به ژن ctxB متصل شده بود. علاوه بر این ژن حاصل در محل برش آنزیم های BamH1 و EcoR1 در وکتور pET28a کلون گردیده بود.

نتیجه گیری: از آنجا که توالی ژن M2e آنفلونزا دچار تغییرات آنتی ژنیک سالیانه نمی شود کاندید مناسبی جهت تولید واکسن آنفلونزا می باشد.با توجه به اینکه M2e ایمونوژن بسیار ضعیفی می باشد فیوژن آن با ایمونوژن های قوی مانند CTB می تواند روشی نوین در تهیه واکسن نوترکیب آنفلونزا باشد.

واژه‌های کلیدی: پروتئین ماتریکس 2، آنفلونزا، واکسن نوترکیب، زیر واحد B توکسین وبا، فیوژن
متن کامل [PDF 614 kb]   (2676 دریافت)    
نوع مطالعه: مقاله تحقیقی | موضوع مقاله: ژنتیک
دریافت: ۱۳۹۱/۱۱/۲۸
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

کد امنیتی را در کادر بنویسید >


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Mirzaei N, Rezaei F. Cloning Influenza m2e- Vibrio cholera ctxB fusion fragment in pET28a plasmid. NCMBJ. 2013; 3 (9) :29-35
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-286-fa.html

میرزایی نیما، رضائی فرهاد. کلون کردن قطعه اتصالی m2e آنفلوانزا- ctxB ویبریو کلرا در پلاسمید pET28a. مجله تازه هاي بيوتكنولوژي سلولي و مولكولي. 1391; 3 (9) :29-35

URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-286-fa.html



دوره 3، شماره 9 - ( 11-1391 ) برگشت به فهرست نسخه ها
مجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولی New Cellular and Molecular Biotechnology Journal
Persian site map - English site map - Created in 0.05 seconds with 31 queries by YEKTAWEB 3638