صبا بابکان، اعظم صفری، رضوان منیری، مریم حمزه میوه رود، سیاوش دستمالچی،
دوره ۹، شماره ۳۴ - ( ۱-۱۳۹۸ )
چکیده
سابقه و هدف: آنزیم گلوتامات اندوپپتیداز (EC ۳,۴.۲۱.۱۹) متعلقبه خانواده سرین پروتئازها است. این آنزیم میتواند با هیدرولیز اختصاصی پیوندهای پپتیدی در آنالیز ساختار پروتئین، سنتز پپتیدها به روش فاز جامد و تهیه نانوتیوبها مورد استفاده قرار گیرد. هدف از این مطالعه تولید آنزیم گلوتامات اندوپپتیداز باکتری Bacillus licheniformis SL-۱ مقاومبه حرارت که بومی ایران است است.
مواد و روشها: در این مطالعه بیان آنزیم گلوتامات اندوپپتیداز از باکتری Bacillus licheniformis SL-۱ در E. coli BL۲۱ i بهصورت پریپلاسمی در دماهای ۱۶، ۲۰ و ۳۷ درجه سانتیگراد و غلظتهای ۴/۰، ۱ و ۲ میلیمولار القاگر بهینه سازی شد. با توجهبه اینکه آنزیم نوترکیب تولید شده دارای دنباله هیستیدینی (His-tag) است از ستون نیکل سفارز برای تخلیص به روش کروماتوگرافی تمایلی استفاده گردید.
یافته ها: شرایط مختلف برای بیان آنزیم نوترکیب گلوتامات اندوپپتیداز بررسی گردید و بهترین نتایج برای بیان پری پلاسمیک و محلول آنزیم در میزبان E. coli BL۲۱ در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد با غلظت ۲ میلیمولار IPTG بهدست آمد.
نتیجه گیری: بررسی کیفی نتایج حاصل از بیان آنزیم تحت شرایط مختلف حاکی از آنستکه بیان پروتئین نوترکیب وابستهبه دما بوده و نیازمند غلظتهای بالای القاگرIPTG است. مطالعه حاضر نتایج اولیه بررسی امکان تولید نوترکیب آنزیم گلوتامات اندوپپتیداز در سیستم بیانی E. coli BL۲۱ است. برای تولید هر چه بهتر آنزیم گلوتامات اندوپپتیداز سایر پارامترهای مؤثر مانند سیستمهای بیانی و روشهای تخلیص جایگزین قابل بررسی و بهینه سازی است.
