دوره 11، شماره 42 - ( 1-1400 )                   جلد 11 شماره 42 صفحات 110-95 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Naeemi S M, Aminzadeh S, Sari S, Nemati F, naseroleslami M. Heterologous Expression, Purification and Determination of Activity of new Carboxypepetidase from Cohnella Ao1. NCMBJ. 2021; 11 (42) :95-110
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-1384-fa.html
نعیمی سید مهدی، امین زاده سعید، ساری سویار، نعمتی منصور فهیمه، ناصرالاسلامی مریم. بیان هترولوگ، خالص سازی و سنجش فعالیت آنزیم کربوکسی پپتیداز نوترکیب جدید از باکتری کوهنلا A01. مجله تازه هاي بيوتكنولوژي سلولي و مولكولي. 1400; 11 (42) :110-95

URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-1384-fa.html


گروه مهندسی زیست فرآیند، پژوهشکده زیست‌فناوری صنعت و محیط‌زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست‌فناوری، ایران ، aminzade@nigeb.ac.ir
چکیده:   (564 مشاهده)
سابقه و هدف: آنزیم‌های تجزیه کننده پروتئین یا پروتئولایتیک با انجام هیدرولیز برگشت­ناپذیر پیوند پپتیدی برای ادامه بقای موجودات زنده ضروری هستند. کربوکسی‌پپتیدازها از جمله آنزیم‌های پروتئولایتیکی هستند که در موجودات بسیاری یافت می‌شوند و از این آنزیم‌ها در صنایع مختلف - مثل صنایع غذایی و داروسازی به­وفور استفاده می‌شود. هدف از این تحقیق، بیان آنزیم کربوکسی پپتیداز باکتری بومی کوهنلا A01، خالص ­سازی و سنجش فعالیت آن است.
مواد و روش­ ها: ابتدا ژن کربوکسی پپتیداز  کوهنلا A01 که در وکتور pET-26b(+) کلون شده بود؛ با ایجاد سلول­های مستعد از باکتری میزبان بیانی (اشرشیاکلی BL21) وارد آن گردید. این باکتری در محیط کشت LB تلقیح و با استفاده از IPTG ، بیان پروتئین القا شد. سپس سلول‌ها جمع­آوری، شکسته شده، پروتئین بیان شده با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل سفاروز، تخلیص شد.
یافته­ ها: نتایج به ­دست آمده مشخص نمودند که آنزیم نوترکیب بیان شده - طبق پیش­بینی انجام شده - دارای ساختمان دومی با 34 درصد مارپیچ آلفا، 26 درصد صفحات بتا، 5 درصد نواحی فاقد ساختار و 35 درصد شامل لوپ و سایر ساختارها بوده، یک گلوتامات کربوکسی پپتیداز به­شمار می‌رود. این آنزیم قادر است در دمای 50 درجه سلسیوس و pH معادل 7، ریشه گلوتامات را از اسید فولیک جدا نماید. وزن مولکولی آن kDa 6/41 بوده، فعالیت محاسبه شده این آنزیم (با سوبسترای فولات) در شرایط سنجش، U/ml 179 است.
نتیجه­ گیری: باتوجه­به این­که گلوتامات کربوکسی پپتیداز (کربوکسی پپتیداز G) دارای کاربرد دارویی است و کربوکسی پپتیداز نوترکیب کوهنلا A01 دارای مقاومت گرمایی و در نتیجه پایداری مناسب در دمای محیط است، به­احتمال می‌توان از این آنزیم پس از بهینه­سازی، در مصارف دارویی استفاده نمود.
متن کامل [PDF 1417 kb]   (179 دریافت) |   |   متن کامل (HTML)  (251 مشاهده)  
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی | موضوع مقاله: سلولی و مولکولی
دریافت: 1399/12/5 | پذیرش: 1400/2/22 | انتشار: 1400/3/31

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA

ارسال پیام به نویسنده مسئول


بازنشر اطلاعات
Creative Commons License این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است.

کلیه حقوق این وب سایت متعلق به مجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولی می باشد.

طراحی و برنامه نویسی : یکتاوب افزار شرق

© 2021 CC BY-NC 4.0 | New Cellular and Molecular Biotechnology Journal

Designed & Developed by : Yektaweb