دوره 12، شماره 46 - ( 1-1401 )
جلد 12 شماره 46 صفحات 34-25 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Phalsaphi S, Amani J, Mirhosseini S A. Cloning, Expression and Purification of the Outer Membrane of Tir Protein from
E.coli O157: H7 and Evaluation its Structure. NCMBJ 2022; 12 (46) :25-34
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-1453-fa.html
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-1453-fa.html
فلسفی شیلا، امانی جعفر، میرحسینی سیدعلی. همسانه سازی، بیان و تخلیص بخش خارج غشایی پروتئین Tir از باکتری E.coli O157:H7 و ارزیابی ساختاری آن. مجله تازه هاي بيوتكنولوژي سلولي و مولكولي. 1401; 12 (46) :25-34
انستیتو سیستم بیولوژی و مسمومیت ها، مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران ، ali.mirh@gmail.com
چکیده: (2362 مشاهده)
سابقه و هدف باکتری اشرشیاکلی انتروهموراژیک (Enterohemorrhagic E. coli) سویهی O157:H7 یک پاتوژن مهم انسان و حیوان است که در انسان موجب بروز اسهال خونریزی دهنده و سندروم اورمی همولیتیک می شود. اتصال به سلولهای میزبان اولین گام در تثبیت این باکتری است که به واسطهی سیستم ترشحی نوع (T3SS) III و از طریق میانکنش بین پروتئینهای ترشحی صورت میگیرد. Tir پروتئینی است که پس از بیان در باکتری و از طریق T3SS به سلول میزبان منتقل و در غشای آن مستقر می شود و نقش مهمی در اتصال باکتری به میزبان دارد. هدف از این تحقیق ساخت سازه ژنی است که دارای فاکتورهای ویرولانس Tir میباشد.
مواد و روش ها: : طراحی پرایمر اختصاصی برای ژن tir با استفاده از نرم افرازOligo انجام شد و تکثیر ژن به وسیله واکنش PCRاز روی DNA الگو صورت گرفت. پس از واکنشهای هضم آنزیمی و الحاق ژن درون ناقل بیانی pET28a ، انتقال ناقل به درون میزبان بیانی انجام شد. پس از تایید همسانسازی ژن، بیان نوترکیب پروتئین Tirبا استفاده از القاگر IPTG صورت گرفت. برای تایید پروتئین Tir آنالیز وسترن بلات انجام شد.
یافته‌ها: : همسان سازی ژن tir درون وکتور pET28a به شکل مناسب بین جایگاههای مطلوب انجام شد و پروتئین Tir پس از القا، پروتئین نوترکیب بیان مناسب و قابل توجهی نشان داد. آنتی بادی مورد استفاده در وسترن بلات نیز توانست به شکل مناسبی Tir را شناسایی کند.
نتیجه‌گیری: در این مطالعه، سازه پایدار محتوی ژن tir ساخته شد که بیان نوترکیب قابل توجهی از پروتئین Tir را از خود نشان داد. بنابراین این سازه را می توان برای تولید پروتئین Tir جهت مطالعات ایمنی زایی علیه E.coli O157:H7 به کاربرد..
مواد و روش ها: : طراحی پرایمر اختصاصی برای ژن tir با استفاده از نرم افرازOligo انجام شد و تکثیر ژن به وسیله واکنش PCRاز روی DNA الگو صورت گرفت. پس از واکنشهای هضم آنزیمی و الحاق ژن درون ناقل بیانی pET28a ، انتقال ناقل به درون میزبان بیانی انجام شد. پس از تایید همسانسازی ژن، بیان نوترکیب پروتئین Tirبا استفاده از القاگر IPTG صورت گرفت. برای تایید پروتئین Tir آنالیز وسترن بلات انجام شد.
یافته‌ها: : همسان سازی ژن tir درون وکتور pET28a به شکل مناسب بین جایگاههای مطلوب انجام شد و پروتئین Tir پس از القا، پروتئین نوترکیب بیان مناسب و قابل توجهی نشان داد. آنتی بادی مورد استفاده در وسترن بلات نیز توانست به شکل مناسبی Tir را شناسایی کند.
نتیجه‌گیری: در این مطالعه، سازه پایدار محتوی ژن tir ساخته شد که بیان نوترکیب قابل توجهی از پروتئین Tir را از خود نشان داد. بنابراین این سازه را می توان برای تولید پروتئین Tir جهت مطالعات ایمنی زایی علیه E.coli O157:H7 به کاربرد..
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی |
موضوع مقاله:
ژنتیک
دریافت: 1399/10/23 | پذیرش: 1400/9/16 | انتشار: 1401/1/22
دریافت: 1399/10/23 | پذیرش: 1400/9/16 | انتشار: 1401/1/22
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
