دوره 14، شماره 56 - ( 7-1403 )
جلد 14 شماره 56 صفحات 82-69 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Bani Aqeel H, Fatahi I, Eskoiyan R, Kalani M R. Membrane Washing, a New Method to Isolate Membrane Phospholipids Without Cell Destruction. NCMBJ 2024; 14 (56) :69-82
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-1703-fa.html
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-1703-fa.html
بنی عقیل حورالسادات، فتاحی اسماعیل، اسکوییان رقیه، کلانی محمدرضا. شست‌وشوی غشایی یک روش جدید برای جداسازی فسفولیپیدهای غشا بدون تخریب سلول. مجله تازه هاي بيوتكنولوژي سلولي و مولكولي. 1403; 14 (56) :69-82
گروه زیست‌شناسی، واحد آیت الله آملی، دانشگاه آزاد اسلامی، آمل، ایران ، esmail_fattahy@yahoo.com
چکیده: (34 مشاهده)
سابقه و هدف: امروزه بخش عظیمی از مطالعات پزشکی به تولید یک ساختار غیرویروسی کارآمد برای انتقال ژن اختصاص یافته است. مواد اولیۀ این ساختارها گران‌قیمت است و هزینۀ زیادی بر محقق تحمیل می‌کند. محصور شدن مولکول DNA در یک فضای بسته که توسط یک غشای دولایۀ لیپیدی از فضای بیرون متمایز شده‌است، شبیه‌ترین ساختار به یک لیپوزوم را در ذهن تداعی می‌کند. هدف از این مطالعه بررسی امکان استفاده از فسفولیپیدهای برداشت‌شده از غشای یک سلول برای ساخت لیپوزوم و انتقال ژن یا دارو به همان سلول می‌باشد.
مواد و روش‌ها: پنج سلول جانوری (HEK293, Hela, SW480, expi-CHO, CHO) و سلول مخمری (ساکارومایسس سرویزیه) انتخاب شده و در محیط‌کشت مناسب کشت داده شدند. روش جدید شست‌وشوی غشایی با ترکیبات مختلف حلّال‌های غیرقطبی شامل اتانول، متانول، کلروفرم و ...، بدون شکستن و تخریب سلول‌ها انجام شد. خالص‌سازی و تفکیک فسفولیپیدهای غشایی به‌وسیلۀ کروماتوگرافی لایۀ نازک (TLC) انجام شد. حلّال فاز متحرک برای بهترین تفکیک فسفولیپیدها نیز بهینه‌سازی شد.
یافته‌ها: با مقایسۀ شش ترکیب حلّال شست‌وشو دهندۀ غشا، مخلوط کلروفرم: متانول: هیدروکسید آمونیوم: اسید استیک (65:25:5:5) بهترین بازده را برای تفکیک و استخراج فسفولیپیدهای غشای سلول داشتند. فسفولیپیدها از غشا برداشت شده و با فاز متحرک بهینه‌سازی شده و کروماتوگرافی لایۀ نازک فسفولیپیدهای اصلی تشکیل‌دهندۀ غشا به‌خوبی جداسازی شدند. نتایج این مطالعه نشان دادند که در سلول‌های CHO، Expi-CHO و SW480 میزان فسفولیپیدهای غشا از بیشترین به کمترین شامل، فسفاتیدیل کولین (POPC)، فسفاتیدیل اتانول آمین (POPE)، فسفاتیدیل سرین (POPS)، کلسترول (CHOL)، اسفنگومیلین (SM) و اینوزیتول مونوفسفوگلیسرید (IMP) می‌باشد. برای سلول‌های HeLa و HEK293 سهم POPS متفاوت بود. سلول مخمری با توجه به رشد سریع و محیط‌کشت ارزان، می‌تواند منبع قابل‌قبولی از فسفولیپید برای خالص‌سازی باشد.
نتیجه‌گیری: با استفاده از ترکیب خاصی از حلّال‌های غیرقطبی می‌توان فسفولیپیدهای غشای سلول را شست‌وشو داد. این فسفولیپیدها می‌توانند به روش کروماتوگرافی لایۀ نازک با استفاده از حلّال خاص فاز متحرک به‌خوبی تفکیک شوند. هزینۀ این فرایند بسیار کمتر از تهیۀ ترکیبات صنعتی ترانسفکشن است. به‌نظر می‌رسد انتقال ژن به‌وسیلۀ لیپوزوم‌های ساخته‌شده با فسفولیپیدهای طبیعی باید راندمان بسیار بالاتری داشته باشد که در تحقیقات بعدی مطالعه و بررسی گردد.
مواد و روش‌ها: پنج سلول جانوری (HEK293, Hela, SW480, expi-CHO, CHO) و سلول مخمری (ساکارومایسس سرویزیه) انتخاب شده و در محیط‌کشت مناسب کشت داده شدند. روش جدید شست‌وشوی غشایی با ترکیبات مختلف حلّال‌های غیرقطبی شامل اتانول، متانول، کلروفرم و ...، بدون شکستن و تخریب سلول‌ها انجام شد. خالص‌سازی و تفکیک فسفولیپیدهای غشایی به‌وسیلۀ کروماتوگرافی لایۀ نازک (TLC) انجام شد. حلّال فاز متحرک برای بهترین تفکیک فسفولیپیدها نیز بهینه‌سازی شد.
یافته‌ها: با مقایسۀ شش ترکیب حلّال شست‌وشو دهندۀ غشا، مخلوط کلروفرم: متانول: هیدروکسید آمونیوم: اسید استیک (65:25:5:5) بهترین بازده را برای تفکیک و استخراج فسفولیپیدهای غشای سلول داشتند. فسفولیپیدها از غشا برداشت شده و با فاز متحرک بهینه‌سازی شده و کروماتوگرافی لایۀ نازک فسفولیپیدهای اصلی تشکیل‌دهندۀ غشا به‌خوبی جداسازی شدند. نتایج این مطالعه نشان دادند که در سلول‌های CHO، Expi-CHO و SW480 میزان فسفولیپیدهای غشا از بیشترین به کمترین شامل، فسفاتیدیل کولین (POPC)، فسفاتیدیل اتانول آمین (POPE)، فسفاتیدیل سرین (POPS)، کلسترول (CHOL)، اسفنگومیلین (SM) و اینوزیتول مونوفسفوگلیسرید (IMP) می‌باشد. برای سلول‌های HeLa و HEK293 سهم POPS متفاوت بود. سلول مخمری با توجه به رشد سریع و محیط‌کشت ارزان، می‌تواند منبع قابل‌قبولی از فسفولیپید برای خالص‌سازی باشد.
نتیجه‌گیری: با استفاده از ترکیب خاصی از حلّال‌های غیرقطبی می‌توان فسفولیپیدهای غشای سلول را شست‌وشو داد. این فسفولیپیدها می‌توانند به روش کروماتوگرافی لایۀ نازک با استفاده از حلّال خاص فاز متحرک به‌خوبی تفکیک شوند. هزینۀ این فرایند بسیار کمتر از تهیۀ ترکیبات صنعتی ترانسفکشن است. به‌نظر می‌رسد انتقال ژن به‌وسیلۀ لیپوزوم‌های ساخته‌شده با فسفولیپیدهای طبیعی باید راندمان بسیار بالاتری داشته باشد که در تحقیقات بعدی مطالعه و بررسی گردد.
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی |
موضوع مقاله:
سلولی و مولکولی
دریافت: 1403/9/24 | پذیرش: 1403/7/1 | انتشار: 1403/7/1
دریافت: 1403/9/24 | پذیرش: 1403/7/1 | انتشار: 1403/7/1
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
