سابقه و هدف: امروزه آنتی‌بادی‌ها‌ در حوزه‌های تشخیص و درمان جایگاه ویژه‌ای را به خود اختصاص داده‌اند. در این‌ میان، آنتی‌بادی‌های مونوکلونال کاملاً انسانی به دلیل عدم برانگیختن پاسخ ایمنی در بدن و کارایی بالا در درمان بیماری‌ها مورد توجه قرار‌گرفته‌اند. تحقیق پیش‌رو به‌منظور ساخت کتابخانه ژنی آنتی‌بادی نوترکیب انسانی از یک فرد واکسینه با توکسوئید کزاز انجام گرفته است.

مواد و روش‌ها: ابتدا از فرد ایمن با توکسوئید کزاز خون گرفته شد. سپس لنفوسیت‌ها جدا و RNA از آن ها استخراج گردید. همه تنوع ژن‌های ناحیه متغیر زنجیره‌های سبک و سنگین آنتی‌بادی به روش RT-PCR تکثیر و به صورت ScFv به یکدیگر متصل شدند. سپس این قطعات به داخلT vector الحاق و به باکتریE. coli DH5α انتقال یافتند. پس از آن، الایزا صورت گرفت. جهت تأیید کتابخانه ژنی آنتی‌بادی، پلاسمید آن استخراج و توالی‌یابی انجام شد.

یافته ها: کیفیت cDNA با انجام واکنش توسط پرایمرهای ژن HPRT تأیید شد. صحت انجام مراحل PCR و کلونینگ، توسط الکتروفورز ژل ‌آگارز و برش آنزیمی مورد تأیید قرار‌گرفت. باکتری‌های حاوی پلاسمید نوترکیب با رشد روی محیط کشت بر اساس رنگ آبی و سفید، مشخص شدند. از کلون‌ها پلاسمید استخراج و توالی‌یابی انجام شد. نتایج حاصل از تشابه توالی‌ها در پایگاه داده ی igblast نشان داد که این توالی‌ها مربوط به ژن آنتی‌بادی انسانی می‌باشند. هم چنین توسط الایزا تأیید این که آنتی بادی اختصاصی توکسین کزاز می باشد، صورت گرفت.

نتیجه گیری: در این تحقیق کتابخانه آنتی‌بادی انسانی از فرد ایمن با توکسوئید کزاز، ساخته شد. سپس، ژن آنتی بادی موجود در این کتابخانه توسط توالی یابی و هم ترازی در پایگاه NCBIمورد تأیید قرار گرفت و الایزا اختصاصیت این آنتی بادی ها را مشخص نمود. در‌ ادامه جهت یافتن ژن آنتی‌با‌دی‌ اختصاصی توکسین‌کزاز در این کتابخانه، لازم است غربال گری به روش نمایش ‌فاژی انجام‌ شود.