دوره 11، شماره 42 - ( 1-1400 )
جلد 11 شماره 42 صفحات 110-95 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
Naeemi S M, Aminzadeh S, Sari S, Nemati F, naseroleslami M. Heterologous Expression, Purification and Determination of Activity of new Carboxypepetidase from Cohnella Ao1. NCMBJ 2021; 11 (42) :95-110
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-1384-fa.html
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-1-1384-fa.html
نعیمی سید مهدی، امین زاده سعید، ساری سویار، نعمتی منصور فهیمه، ناصرالاسلامی مریم. بیان هترولوگ، خالص سازی و سنجش فعالیت آنزیم کربوکسی پپتیداز نوترکیب جدید از باکتری کوهنلا A01. مجله تازه هاي بيوتكنولوژي سلولي و مولكولي. 1400; 11 (42) :95-110
گروه مهندسی زیست فرآیند، پژوهشکده زیست‌فناوری صنعت و محیط‌زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست‌فناوری، ایران ، aminzade@nigeb.ac.ir
چکیده: (3259 مشاهده)
سابقه و هدف: آنزیم‌های تجزیه کننده پروتئین یا پروتئولایتیک با انجام هیدرولیز برگشتناپذیر پیوند پپتیدی برای ادامه بقای موجودات زنده ضروری هستند. کربوکسی‌پپتیدازها از جمله آنزیم‌های پروتئولایتیکی هستند که در موجودات بسیاری یافت می‌شوند و از این آنزیم‌ها در صنایع مختلف - مثل صنایع غذایی و داروسازی – بهوفور استفاده می‌شود. هدف از این تحقیق، بیان آنزیم کربوکسی پپتیداز باکتری بومی کوهنلا A01، خالص سازی و سنجش فعالیت آن است.
مواد و روش ها: ابتدا ژن کربوکسی پپتیداز کوهنلا A01 که در وکتور pET-26b(+) کلون شده بود؛ با ایجاد سلولهای مستعد از باکتری میزبان بیانی (اشرشیاکلی BL21) وارد آن گردید. این باکتری در محیط کشت LB تلقیح و با استفاده از IPTG ، بیان پروتئین القا شد. سپس سلول‌ها جمعآوری، شکسته شده، پروتئین بیان شده با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل سفاروز، تخلیص شد.
یافته ها: نتایج به دست آمده مشخص نمودند که آنزیم نوترکیب بیان شده - طبق پیشبینی انجام شده - دارای ساختمان دومی با 34 درصد مارپیچ آلفا، 26 درصد صفحات بتا، 5 درصد نواحی فاقد ساختار و 35 درصد شامل لوپ و سایر ساختارها بوده، یک گلوتامات کربوکسی پپتیداز بهشمار می‌رود. این آنزیم قادر است در دمای 50 درجه سلسیوس و pH معادل 7، ریشه گلوتامات را از اسید فولیک جدا نماید. وزن مولکولی آن kDa 6/41 بوده، فعالیت محاسبه شده این آنزیم (با سوبسترای فولات) در شرایط سنجش، U/ml 179 است.
نتیجه گیری: باتوجهبه اینکه گلوتامات کربوکسی پپتیداز (کربوکسی پپتیداز G) دارای کاربرد دارویی است و کربوکسی پپتیداز نوترکیب کوهنلا A01 دارای مقاومت گرمایی و در نتیجه پایداری مناسب در دمای محیط است، بهاحتمال می‌توان از این آنزیم پس از بهینهسازی، در مصارف دارویی استفاده نمود.
مواد و روش ها: ابتدا ژن کربوکسی پپتیداز کوهنلا A01 که در وکتور pET-26b(+) کلون شده بود؛ با ایجاد سلولهای مستعد از باکتری میزبان بیانی (اشرشیاکلی BL21) وارد آن گردید. این باکتری در محیط کشت LB تلقیح و با استفاده از IPTG ، بیان پروتئین القا شد. سپس سلول‌ها جمعآوری، شکسته شده، پروتئین بیان شده با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل سفاروز، تخلیص شد.
یافته ها: نتایج به دست آمده مشخص نمودند که آنزیم نوترکیب بیان شده - طبق پیشبینی انجام شده - دارای ساختمان دومی با 34 درصد مارپیچ آلفا، 26 درصد صفحات بتا، 5 درصد نواحی فاقد ساختار و 35 درصد شامل لوپ و سایر ساختارها بوده، یک گلوتامات کربوکسی پپتیداز بهشمار می‌رود. این آنزیم قادر است در دمای 50 درجه سلسیوس و pH معادل 7، ریشه گلوتامات را از اسید فولیک جدا نماید. وزن مولکولی آن kDa 6/41 بوده، فعالیت محاسبه شده این آنزیم (با سوبسترای فولات) در شرایط سنجش، U/ml 179 است.
نتیجه گیری: باتوجهبه اینکه گلوتامات کربوکسی پپتیداز (کربوکسی پپتیداز G) دارای کاربرد دارویی است و کربوکسی پپتیداز نوترکیب کوهنلا A01 دارای مقاومت گرمایی و در نتیجه پایداری مناسب در دمای محیط است، بهاحتمال می‌توان از این آنزیم پس از بهینهسازی، در مصارف دارویی استفاده نمود.
نوع مطالعه: مقاله پژوهشی |
موضوع مقاله:
سلولی و مولکولی
دریافت: 1399/12/5 | پذیرش: 1400/2/22 | انتشار: 1400/3/31
دریافت: 1399/12/5 | پذیرش: 1400/2/22 | انتشار: 1400/3/31
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
