حسنی فرد محبوبه، اولاد غلامرضا، امانی جعفر. طراحی و تولید آپتامرعلیه کلرا توکسین با استفاده از تکنیک سلکس. مجله تازه هاي بيوتكنولوژي سلولي و مولكولي. ۱۴۰۳; ۱۵ (۵۷) :۴۳-۵۶
URL: http://ncmbjpiau.ir/article-۱-۱۷۱۷-fa.html
مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، پژوهشکده فناوری های زیست پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله(عج)، تهران، ایران. ، jafar.amani@gmail.com
چکیده: (۱۷۴ مشاهده)
سابقه و هدف: اسهال، دومین عامل مرگ و میر در جهان محسوب می شود. مهمترین عامل ایجاد این بیماری کلرا توکسین میباشد که توسط باکتری با همین نام (ویبریو کلرا) تولید میشود. تشخیص سریع در مراحل اولیه بیماری، میتواند از مرگ و میر ناشی از آن جلوگیری کند. روشهای تشخیصی بسیاری در این زمینه وجود دارد ولی این روشها یا زمانبر بوده یا ارزش تشخیصی کمی دارند. آپتامرها، نوکلئوتیدهای تک رشتهای هستند که برای شناسایی طیف وسیعی از مولکولها و بیومولکولها استفاده میشوند. هدف از تحقیق حاضر، جداسازی آپتامری مناسب جهت تشخیص کلرا توکسین و استفاده از آن در کیتهای تشخیصی سریع میباشد.
مواد و روشها: در این تحقیق، جداسازی آپتامر علیه کلرا توکسین صورت گرفت. ابتدا از تکنیک PCR نامتقارن برای تولید آپتامرها استفاده شد و سپس با استفاده از تکنیک SELEX(11 دور)، جداسازی آپتامرهای اختصاصی انجام شد. در مراحل انجام کار، با کمک تکنیک الازا ( ELASA) جداسازی آپتامر مناسب انجام شد.
یافته ها: آپتامرهای مناسب علیه کلرا توکسین جداسازی و توالی یابی شدند. از بین آپتامرهای جداشده یکی به عنوان آپتامر منتخب مورد بررسی قرار گرفت. این آپتامر، بیشترین تمایل به کلرا توکسین وکمترین تمایل را به پروتئینهای مشابه نشان داد. این بررسی با کمک الازا انجام شد ومیزان جذب برای کلرا توکسین 8/1 به دست آمد. همچنین بررسی های بیوانفورماتیکی پایداری آپتامر را نشان دادند.
نتیجه گیری: آپتامر انتخاب شده دارای برهمکنش مناسب با کلرا توکسین بوده و به طور اختصاصی با میل ترکیبی بالا به مولکول هدف (کلرا توکسین) متصل می شود. با بکارگیری آپتامر به دست آمده در کیت های تشخیصی، میتوان رقتهای کم توکسین را در نمونه های مورد ارزیابی شناسایی و اقدام موثر و سریع انجام داد.
نوع مطالعه:
مقاله پژوهشی |
موضوع مقاله:
سلولی و مولکولی دریافت: 1403/12/5 | پذیرش: 1403/10/1 | انتشار: 1403/10/1